海洋球石藻(Emiliania huxleyi)中化合物的分离鉴定及其生物学活性初探

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海洋微藻作为海洋生态系统的初级生产者,在物质循环和能量流动中起到至关重要的作用。其代谢物中富含蛋白质、脂肪酸、维生素、色素、多酚、多糖及萜类等多种生物活性物质,尤其是海洋微藻细胞中总脂含量最高可达细胞干重的80%。这些化合物具有良好的抑菌、抗氧化、抗肿瘤等生物功能。海洋球石藻(Coccolithophores)是一类单细胞海洋微型浮游植物,隶属于定鞭藻门(Haptophyta)定鞭藻纲(Prymnesiophyceae)。海洋球石藻代谢产物中富含多种生物活性物质,如二十二碳六烯酸(DHA)、聚酮类化合物等,在生物技术领域具有广阔的应用前景。但目前有关海洋球石藻脂类活性物质领域的研究较少。本研究以海洋球石藻Emiliania huxleyi BOF92为研究对象,通过比较和优化其总脂的提取条件,建立一种高效提取球石藻细胞总脂的工艺,对脂类粗提物进行体外抗菌、抗氧化活性分析,并筛选其中活性较高的组分进一步进行分离、鉴定及活性分析。主要研究结果如下:(1)比较了不同提取溶剂、不同前处理方法对球石藻总脂提取率的影响,最终选择乙醇作为提取溶剂,采用溶剂浸提的方法。通过单因素和正交试验确定海洋球石藻中总脂提取的最佳工艺条件为:乙醇浓度75%,液料比10:1(mL/g),浸提温度35℃,浸提时间120 min,在该条件下海洋球石藻细胞总脂提取率是细胞干重的26.38%,实验重复性好。(2)海洋球石藻藻粉经过乙醇浸提获得浸膏后,分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取获得三相萃取物。抑菌实验表明乙酸乙酯相对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、酿酒酵母都有一定的抑制作用;石油醚相对副溶血性弧菌的抑制效果较强,对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的生长也有一定的抑制能力但相对较弱;而正丁醇相对细菌的抑制能力较弱,而对霉菌的抑制效果较强。抗氧化试验综合表明乙酸乙酯相的抗氧化能力最强。(3)从海洋球石藻乙酸乙酯相中分离纯化出6种单体化合物,经过核磁共振波谱、高分辨质谱、红外光谱等分析,其中有4种化合物鉴定出结构,分别为棕榈酸、叶绿醇、肉豆蔻酸和邻苯二甲酸二丁酯。(4)四种单体化合物中,棕榈酸、肉豆蔻酸和邻苯二甲酸二丁酯无抗氧化活性,但对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、副溶血性弧菌有一定的抗菌活性,细胞毒活性试验效果不明显。叶绿醇无抗菌活性,抗氧化能力很强,对肝癌细胞Hep G2有较强的抑制作用。
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