海参岩藻聚糖硫酸酯的酯化改性及其抗氧化活性研究

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海地瓜是我国一种低值海参,其体壁的多糖是一种活性物质。本实验以海地瓜为原料,通过正交试验得出最佳的酶解条件,并结合超滤法提取海参岩藻聚糖硫酸酯。通过比较浓硫酸法、三氧化硫吡啶-吡啶法、三氧化硫吡啶-DMF法、氯磺酸-吡啶法和氯磺酸吡啶-DMF法初步研究了海参岩藻聚糖硫酸酯的硫酸酯化改性,并对海参硫酸酯化多糖进行初步的抗氧化活性研究。实验结果如下:通过正交试验优化了酶解条件,结果表明料液比1:40条件下,酶解时间8h,酶解温度50℃,加酶量10%,pH值为7.0,此时多糖含量为(1.0657±0.014)mg/mL,提取率为(3.24±0.03)%。再运用超滤法对酶解液进行处理,用200KDa的超滤膜,操作压力为0.2MPa时对酶解液进行超滤,此时蛋白质脱除率为(91.09±0.15)%。分别运用了浓硫酸法、三氧化硫吡啶-吡啶法、三氧化硫吡啶-DMF法、氯磺酸-吡啶法、氯磺酸吡啶-DMF法对海参岩藻聚糖硫酸酯进行了酯化改性。通过测定其硫酸根含量确定最佳的反应条件,并用红外对其进行了定性分析。通过单因素实验,结果表明:浓硫酸法酯化改性海参岩藻聚糖硫酸酯,当反应时间为0.5h时,酯化剂的最佳用量为物料比1:30,硫酸根含量可达到(22.50±1.78)%。三氧化硫吡啶-吡啶法:当反应时间为1h时,酯化剂物料质量比为1:6时酯化效果最好,硫酸根含量为(28.03±2.23)%。三氧化硫吡啶-DMF法:当反应时间为1h,反应温度60℃时,酯化剂物料质量比为1:6时,硫酸根含量为(28.52±1.82)%。氯磺酸-吡啶法:当反应时间为1h时,氯磺酸:吡啶配比为1:4.7酯化效果最好,硫酸根含量为(52.17±1.84)%。氯磺酸吡啶-DMF法:当酯化剂配比为1:1,反应温度30℃时,最佳的反应时间2h,硫酸根含量为(59.49±2.05)%。通过抗氧化活性研究,结果表明,硫酸化多糖对DPPH·的清除效果最好,对O2-·和·OH的清除能力均较差。浓硫酸法硫酸酯化多糖:随着硫酸根含量的上升,硫酸酯化多糖对O2-·的清除率有显著上升,对DPPH·和·OH的清除作用呈现一个十分缓慢的上升过程。三氧化硫吡啶-吡啶法硫酸酯化多糖:硫酸化多糖对O2-·、·OH和DPPH·的清除作用均是先上升,后下降,最后基本保持平稳。三氧化硫吡啶-DMF法硫酸酯化多糖:硫酸化多糖对O2-·、·OH的清除率并不理想。相比而言,酯化后多糖对DPPH·的清除率较明显,当硫酸根含量增加时,DPPH·清除率也增长。氯磺酸-吡啶法硫酸酯化多糖:随着硫酸根含量增加,氯磺酸-吡啶法硫酸酯化多糖对O2-·、·OH清除率效果一直缓慢增加,对DPPH·清除率显著增长。氯磺酸吡啶-DMF法硫酸酯化多糖:硫酸化多糖对O2-·、·OH和DPPH·的清除率都呈现先上升后基本保持平稳的趋势。
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