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目的:构建带StrepII/FLAG串联亲和标签的重组赖氨酰氧化酶(Lysyl oxidase,LOX)蛋白慢病毒表达载体并在乳腺癌MDA-MB-231细胞中表达,利用StrepII/FLAG标签纯化富集LOX的复合体,经LC-MS/MS进行蛋白鉴定,结果用于生物信息学分析和进一步研究LOX及其相互作用蛋白质在乳腺癌中的功能。方法:设计引物通过聚合酶链式反应获得带StrepII/FLAG串联亲和标签的LOX蛋白(LOX-SF)的亲本质粒,双酶切后鉴定测序克隆至GV303表达载体,连同慢病毒包装质粒共同转染293T得到GV303/LOX-SF慢病毒,将其转染MDA-MB-231细胞,使用荧光定量PCR和蛋白质印迹实验对细胞中重组蛋白LOX-SF进行检测。经过Streptactin superflow和Anti-FLAG M2树脂纯化,经过SDS-PAGE分离、银染、切胶、酶解后经反相纳升级液相色谱(Nano-RPLC)/ESI-MS/MS进行分析及反相色谱分离。结果:构建带StrepII/FLAG标签的慢病毒载体,通过转染MDA-MB-231细胞内稳定表达LOX-SF重组蛋白,经过纯化获得LOX-SF重组蛋白复合物,质谱共鉴定到425个与LOX相互作用蛋白(可信度95%)。结论:在鉴定到的425个蛋白中,分析结果提示LOX所在的功能类共有20个,质谱中的蛋白大部分与Cancer、Infectious Disease、Hematological Disease、ImmunologicalDisease等疾病相关。鉴定到的蛋白可信度排前的参与mTOR Signaling、Remodeling ofEpithelial Adherens Junctions、Actin Cytoskeleton Signaling信号通路,提示LOX与肿瘤细胞的侵袭和转移有关。质谱蛋白相互之间的作用依据分子功能划分成16个网络,其中LOX直接参与了数据库中之一的功能网络。另外同质谱鉴定到的蛋白进行匹配,GV303/LOX-SF的构建,使带SF融合标签的LOX蛋白在MDA-MB-231中的成功表达及纯化,为筛选和研究赖氨酰氧化酶及其相互作用蛋白在乳腺癌细胞系内的功能奠定了实验基础。