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目前,多重耐药革兰阴性菌,特别是碳青霉烯耐药肠杆菌已成为临床抗感染治疗面临的一大挑战,多粘菌素也被认为是治疗多重耐药革兰阴性菌感染的最后一道防线。然而,随着多粘菌素临床应用以及畜牧业中的使用增加,临床中对多粘菌素耐药的肠杆菌科细菌已不断被分离。目前,现有耐药机制并不能完全解释临床菌株对多粘菌素耐药的原因,本研究将进一步探讨肺炎克雷伯菌对多粘菌素产生耐药以及异质性耐药的机制。第一部分主要对产KPC的肺炎克雷伯菌异质性耐药情况的检测及其对多粘菌素异质性耐药的机制研究。我们对收集的产KPC肺炎克雷伯菌做了多粘菌素药敏测定以及菌落谱型分析,结果显示目前临床获得的产KPC肺炎克雷伯菌对多粘菌素的耐药率仍然较低(1%),但其对多粘菌素有着很高的异质性耐药率(100%)。通过对相关耐药基因的分析,我们发现mgrB基因的失活是导致产KPC肺炎克雷伯菌发生多粘菌素异质性耐药的最主要机制,其失活方式包括有插入序列(Insertion sequence IS)的插入失活,基因编码区片段的缺失,碱基替换导致的提前终止或移码突变,以及启动子序列区域IS序列的插入破坏等。另外双组分系统pmrA/B,phoP/Q中的突变也可以导致对多粘菌素的异质性耐药。第二部分主要检测了质粒介导的多粘菌素耐药基因mcr-l对碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产生高水平多粘菌素耐药突变的影响。我们将三株碳青霉烯耐药菌株(XH209、KP10、Q3),通过电转化构建了携带mcr-l基因的转化株,并测定了它们发生高水平耐药的突变几率。结果显示mcr-l基因会导致肺炎克雷伯对多粘菌素的耐药,但并不会影响其发生更高水平耐药的突变。而在大肠埃希菌中,mcr-l基因可以使大肠埃希菌有更高的高水平多粘菌素耐药突变几率。对耐药机制进一步的分析研究显示mgrB基因的失活是导致肺炎克雷伯菌产生高水平多粘菌素耐药突变的重要机制,而携带mcr-1基因并不会使得其对多粘菌素有更高的适应性。在大肠埃希菌中,mcr-1基因可以与染色体上的突变发挥协同作用来达到更高水平的多粘菌素耐药。第三部分中我们通过菌株生长速度的测定和大蜡螟幼虫感染实验评估了mcr-1基因对肺炎克雷伯菌造成的适应性代价。结果显示mcr-1基因对肺炎克雷伯菌生长速度的影响具有菌株特异性,而mcr-1基因并不会引起肺炎克雷伯菌毒力的改变。也就是mcr-1基因的表达不会引起肺炎克雷伯菌明显的适应性代价。