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目的:中国是世界人口大国也是癌症高发的国家,由于肿瘤多起病隐匿、早期表现不明显,导致多数肿瘤患者在发现时就已经处于中晚期阶段,治疗效果不理想患者生活质量大大降低。所以肿瘤的早期诊断、早治疗对肿瘤患者来说十分重要。然而目前肿瘤的诊断主要依赖于影像学和细胞学检查,诊断能力有限,目前亟待出现一种能更早期诊断肿瘤的手段。自从Landsteier提出机体内存在自身抗体(autoantibody)以来,人们逐渐对自身抗体有了深刻的认识。在长期肿瘤发病机制研究过程中,学者们认为基因突变是最基本的触发环节或始动因素,这些异常表达的蛋白就成为了肿瘤抗原。相对于浓度较低的肿瘤抗原,自身抗体的检测具有更高的敏感性。因此我们检测高发肿瘤中自身抗体的表达变化,以期寻找到可用于肿瘤辅助诊断的新型肿瘤标志物。方法:通过查阅文献和课题组前期工作基础,本研究中纳入5种目标蛋白,分别是m RNA的结合蛋白IMP-1、凋亡抑制基因蛋白Survivin、肿瘤抑制因子P16、转录调节蛋白EZH2和原癌基因蛋白Bmi-1。利用免疫学分析软件和表位数据库,预测、设计并合成5种蛋白的多肽抗原片段,应用经过我们优化改良的ELISA检测方法,包被多肽抗原,根据免疫学抗原抗体结合原理检测血浆中自身抗体水平。研究共纳入未经任何抗癌治疗的首次诊断为恶性肿瘤的肝癌患者、食管癌患者、肺癌患者、乳腺癌患者和健康人群各200例。设置质控血衡量检测的稳定性,根据酶标仪测得的样本OD和质控OD计算相对结合指数,降低非特异结合和检测误差。应用SPSS21.0进行数据统计和分析,比较自身抗体水平在不同肿瘤、不同分期中的表达变化,分析其在不同肿瘤中表达特点的同时,探讨其在肿瘤诊断中的作用。结果:1肝癌患者血浆5种肿瘤相关抗原自身抗体检测中,EZH2和Bmi-1自身抗体水平出现显著升高(p<0.001;p<0.001),进一步按肿瘤分期分析发现,早期患者EZH2和Bmi-1自身抗体水平高于晚期患者。受试人群ROC曲线分析发现,EZH2和Bmi-1自身抗体检测在肝癌诊断中具有较高的应用价值,特异度90%情况下,肝癌检测敏感度分别为22%和32%。2在非小细胞肺癌患者血浆中,同样检测了EZH2、Bmi-1、P16、IMP-1和Survivin自身抗体表达变化。其中P16和Survivin自身抗体表达出现显著升高(p<0.001;p<0.001),虽然IMP-1亦出现升高趋势,但没有统计学差异。以肿瘤分期分层分析中,P16和Survivin自身抗体在肺癌早期升高更明显。受试人群ROC曲线分析发现,P16和Survivin自身抗体在肺癌诊断中具有很好的临床价值,特异度90%情况下其敏感度分别为32%和20%。3食管癌患者血浆中,我们同样检测了EZH2、Bmi-1、P16、IMP-1和Survivin自身抗体表达变化。食管癌和肺癌中自身抗体表达变化趋势相似,P16和Survivin自身抗体表达出现显著升高(p<0.001;p<0.001),以肿瘤分期分层分析中,P16和Survivin自身抗体在食管癌早期升高不如肺癌明显。受试人群ROC曲线分析发现,特异度90%情况下,食管癌检出的敏感度分别为26%和15%。4为更好判断肿瘤相关抗原自身抗体在不同肿瘤诊断中的特异性,在乳腺癌患者血浆中,我们同样检测了EZH2、Bmi-1、P16、IMP-1和Survivin自身抗体表达变化。P16和Survivin自身抗体表达在乳腺癌中略有升高,与健康组存在统计学差异(p=0.013;p=0.000),在肿瘤分期中没有明显的差异。受试人群ROC曲线分析发现,特异度90%情况下,乳腺癌检出的敏感度分别为20%和16%。5以肝癌、肺癌、食管癌和乳腺癌的临床传统标志物AFP、EGFR和HER2为分层表型,分析EZH2、Bmi-1、P16、IMP-1和Survivin自身抗体在不同表型表达变化发现,HER2和EGFR过表达与自身抗体表达无关。有趣的是,肝癌患者中AFP的表达与EZH2和Bmi-1自身抗体的表达呈现正相关。结论:1EZH2和Bmi-1自身抗体在肝癌患者中表达水平明显升高,而在其他肿瘤中表达变化并不明显,EZH2和Bmi-1自身抗体可能是肝癌的潜在生物学标志物,对肝癌诊断有一定辅助作用,且与AFP的表达有显著相关性。其联合检测可有效提高肝癌检出的敏感度和特异度。2非小细胞肺癌中P16和Survivin自身抗体表达水平在肺癌患者中明显升高,其中P16和Survivin自身抗体的敏感度和特异度最好,可以作为肺癌诊断指标,有待进一步优化。3食管癌中P16和Survivin自身抗体表达水平在肿瘤组和健康人群之间存在显著差异,但不如肺癌中更明显,可以作为食管癌辅助诊断的参考指标。4Survivin自身抗体表达在乳腺癌中略有升高,虽然Survivin自身抗体在肺癌和食管癌也均明显升高,但在以上3种肿瘤中其检测的敏感度存在差异,需进一步扩大样本来验证其作为标志物的特异性。5自身抗体检测在肿瘤早期诊断中具有一定辅助作用,有成为肿瘤诊断新方法的潜能。