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目的:本研究旨在探讨孕酮对戊型肝炎病毒(HEV)感染细胞中Ⅰ型IFN信号通路的机制的影响,为孕妇感染戊型肝炎的临床治疗和预防控制提供理论基础。方法:HEV感染A549细胞后,荧光定量PCR检测HEV。细胞感染模型建立成功后,用不同剂量孕酮(PG)、米非司酮(MF)和干扰素ɑ(IFN-ɑ)单独或联合处理模型细胞,以未加药物处理的模型细胞和未感染病毒A549细胞为对照,采用Western-blotting检测不同组细胞JAK-STAT信号通路中磷酸化蛋白质酪氨酸激酶(Jak1)、磷酸化酪氨酸蛋白(Tyk2)、信号传导转录激活因子1(Stat2)、信号传导转录激活因子(Stat2)磷酸化水平及黏病毒抗性蛋白1(MX1)、蛋白激酶(PKR)、2,5寡腺苷酸合成酶1(OAS1)蛋白表达水平。结果:1.HEV感染A549细胞后,提取细胞内RNA,进行荧光定量PCR,结果显示在溶解温度Tm=80℃处呈现特异的峰值,没有引物二聚体和非特异性产物,经测序结果提示模型建立成功。2.模型组磷酸化Jak1蛋白表达上调(vs空白对照组,P<0.001);IFN-ɑ干预可引起磷酸化Jak1蛋白表达下调(vs空白对照组,P<0.001);仅用200ng/ml PG干预,磷酸化Jak1蛋白表达下调(vs空白对照组,P<0.001);不同浓度的PG(50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml)和IFN-ɑ处理,100ng/ml和200ng/ml PG组磷酸化Jak1蛋白的表达水平最高(vs空白对照组,P<0.001;vs空白对照组,P<0.001)。MF和PG共同干预组与相同浓度PG干预组相比,磷酸化Jak1蛋白的表达水平差异没有统计学意义。3.与空白对照组相比,模型组磷酸化Tyk2蛋白表达的上调(P<0.001);用IFN-ɑ干预HEV-A549细胞,可引起磷酸化Tyk2蛋白表达上调(vs空白对照组,P<0.001);仅用200ng/ml PG干预,磷酸化Tyk2蛋白表达水平低于模型组(P<0.001)但高于空白对照组水平(P<0.001);用不同浓度的PG(50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml)和IFN-ɑ处理HEV-A549细胞,干预组3的表达水平高于其他组(vs干预组2,P<0.001;vs干预组4,P<0.001;vs干预组5,P<0.001)。PG可能通过PG受体PR之外的受体结合或者作用,对磷酸化Tyk2蛋白的表达产生影响。4.构建HEV细胞感染模型前后磷酸化Stat1蛋白表达水平差异没有统计学意义(模型组vs空白对照组,P=0.501);用IFN-ɑ干预HEV-A549细胞,磷酸化Stat1蛋白表达上调(vs空白对照组,P<0.001);仅用200ng/ml PG磷酸化Stat1蛋白表达水平高于模型组(P=0.021)和空白对照组水平(P=0.005);用不同浓度的PG(50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml)和IFN-ɑ处理HEV-A549细胞,200ng/ml PG组的磷酸化Stat1蛋白表达水平都高于其他PG浓度组(vs干预组2,P<0.001;vs干预组3,P<0.001;vs干预组5,P<0.001)。孕酮可能通过孕酮受体PR之外的受体结合或者作用,对磷酸化Stat1蛋白的表达产生影响。5.构建HEV细胞感染模型前后磷酸化Stat2蛋白未表达,用IFN-ɑ干预后,可诱导磷酸化Stat2蛋白表达;干预组6,用PG干预,同样可诱导磷酸化Stat2蛋白表达;200ng/ml PG组的磷酸化Stat2蛋白表达水平高于其他PG浓度组(vs干预组2,P<0.001;vs干预组3,P<0.001;vs干预组5,P<0.001)。PG可能通过PG受体PR之外的受体结合或者作用,对磷酸化Stat2蛋白的表达产生影响。6.MX1蛋白的表达结果与磷酸化Stat2蛋白表达相似,HEV感染A549细胞后,用IFN-ɑ干预,可诱导MX1蛋白表达;用不同浓度的PG处理,干预组3的MX1蛋白表达水平高于组1(P=0.001)且高于其他浓度组(vs干预组2,P<0.001;vs干预组4,P=0.26;vs干预组5,P<0.001);PG可能通过PG受体PR之外的受体结合或者作用,PG对磷酸化MX1蛋白的表达产生影响。7.构建细胞感染模型后PKR蛋白表达水平上调(vs空白对照组,P=0.013);用IFN-ɑ干预细胞感染模型,同样上调PKR蛋白的表达(vs空白对照组,P<0.001);用不同浓度的PG(50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml)和IFN-ɑ处理,100ng/ml和200ng/ml PG组的PKR蛋白表达水平差异没有统计学意义(P=0.596),但都高于其他PG浓度组(vs干预组2,P<0.001;vs干预组5,P<0.001);PG可能通过PG受体PR之外的受体结合或者作用,对磷酸化PKR蛋白的表达上调。8.构建细胞感染模型后对OAS1蛋白表达没有影响(vs空白对照组,P=1.000);HEV感染后,用不同浓度的PG(50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml)和IFN-ɑ处理,100ng/ml PG高于其他PG浓度组(vs干预组2,P=0.005;vs干预组4,P<0.001;vs干预组5,P<0.001);PG可能通过PG受体PR之外的受体结合或者作用,磷酸化OAS1蛋白的表达上调。结论:1.HEV感染对A549细胞中Ⅰ型IFN信号通路有影响,可以上调PKR、磷酸化Tyk2、磷酸化Jak1蛋白表达水平,对磷酸化Stat1、OAS1蛋白的表达没有影响,单独的HEV感染不能诱导磷酸化Stat2、MX1蛋白的表达。2.PG、IFN、HEV三者之间可能相互作用,不同浓度干预,100ng/ml和200ng/ml孕酮组通路蛋白水平较高;50ng/ml和400ng/ml孕酮组蛋白水平较低;孕酮可能与孕酮受体以外的其他受体结合或作用,下调磷酸化Tyk2、磷酸化Stat2、MX1、PKR、OAS1蛋白的表达水平。