东北马鹿鹿茸上皮组织cDNA文库构建及胰岛素样生长因子(IGFs)基因的克隆

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本研究以马鹿鹿茸上皮组织为材料,利用SV Total RNA试剂盒分离抽提总RNA,并运用SMART技术构建了马鹿鹿茸上皮组织全长cDNA文库。试验结果表明:(1)总RNA电泳中18S、28S两条带清晰明显无降解,总RNA质量好、纯度高,符合建库要求。(2)经鉴定原始文库滴度为1.28×106 pfu/ml,经筛选文库重组率达到85%以上,插入片断平均长度约为1.5 kb,扩增后文库滴度为2.4×108pfu/ml。说明构建的文库质量合格。参考野猪Sus scrofa(DQ784687)、原牛Bos Taurus(BTILGF A)、盘羊Ovis aries(NM001009774)、人Homo sapiens(NM000618)、小鼠Mus musculus(AF440694)等物种的IGF1基因组DNA序列,设计兼并性引物,用PCR方法从文库中扩增出一条长约500bp的DNA片段,测序表明马鹿鹿茸上皮组织IGF1基因CDS区序列长469bp,与野猪Sus scrofa、原牛Bos Taurus、盘羊Ovis aries、人Homo sapiens、小鼠Musmusculus的IGF1基因CDS区核苷酸序列同源性依次为97.8%、97.6%、93.1%、91.8%和87.2%;而氨基酸序列同源性依次为97.4%、96.8%、94.8%、94.2%和93.0%。参考野猪Sus scrofa(NM.213883)、原牛Bos Taurus(BTILGF2)、盘羊Ovis aries(SHPIGFIIA)、小鼠Mus musculus(MMU71085)、人Homo sapiens(NM001007139)、大鼠Rat(NM031511)等物种的IGF2基因组DNA序列,设计兼并性引物,用PCR方法从文库中扩增出一条长约600bp的DNA片段,测序表明马鹿鹿茸上皮组织IGF2基因CDS区长540bp,与野猪Sus scrofa、原牛Bos Taurus、盘羊Ovis aries、小鼠Musmusculus、人Homo sapiens和大鼠Rat IGF2基因的核苷酸序列同源性分别是86.5%、95.8%、95.0%、85.8%、82.3%、82.7%;上述研究结果一方面为揭开鹿茸的生长发育机制提供实验数据,另一方面为马鹿优良新品种分子标记选育和分子设计奠定基础。
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