前言 肾小球细胞外基质(ECM)的成分合成增强、降解被抑制继而造成ECM的过度沉积是引起肾小球硬化的主要原因。肾小球系膜细胞能受许多致病因子的刺激而活化、增殖，并引起ECM过量生成和积聚，与肾小球硬化的发病机理密切相关。基质金属蛋白酶(MMPs)是ECM降解过程中最主要的降解酶之一，MMPs表达降低或活性下降能引起ECM降解减少造成ECM异常沉积，从而导致肾小球硬化和肾间质纤维化。肝细胞生长因子(HGF)是一强的肾营养因子，能通过促进肾上皮细胞合成MMPs以减缓肾小管间质纤维化的进展，但HGF是否能通过调节肾小球系膜细胞的MMPs表达从而改善肾小球ECM的异常代谢目前尚未见到相关报道，因此我们拟通过研究HGF对大鼠系膜细胞(RMC)表达MMP-2，-9的影响，并观察系膜基质的主要成分纤维连接蛋白(FN)的变化以探讨HGF对ECM代谢可能的作用。 材料与方法 1．对体外培养RMC应用不同浓度的人重组HGF(0，5，10，25，50，75ng／ml)孵育24小时，用MTT法检测HGF对RMC增殖的影响，选取对RMC增殖无影响的浓度范围进行下一步试验。 2．对体外培养RMC应用不影响其增殖的不同浓度的人重组HGF(0，5，10，25ng／ml)孵育24小时，收集细胞加入细胞裂解液以提取细胞胞浆总蛋白，用紫外分光光度法测定蛋白浓度，用细胞裂解液调整样品蛋白浓度(5mg／ml)。 3．应用明胶酶谱法(Zymography)检测RMC胞浆总蛋白中MMP-2，-9的活性：取总量为50μg蛋白标本，上样于含1g／L白明胶的8％SDS-聚丙烯酰胺凝胶上电泳，电泳结束后在37℃显影缓冲液下孵育18小时，应用考马斯亮蓝法染色、脱色，扫描凝胶并作计算机信号吸光度分析。 4．应用免疫印迹法(Western blotting)检测RMC胞浆总蛋白中MMP-2，-9，FN的蛋白表达水平：取总量为50μg蛋白标本，上样于6％～8％SDS-聚丙烯酞胺凝胶上电泳，电泳结束后在4℃、80V电压的条件下转移2一4小时至PVDF膜，5%脱脂奶粉封闭后，分别加入抗大鼠MMP一，一9、FN多克隆抗体以及相应的二抗，ECL试剂或碱性磷酸酶显色剂显色，扫描图像并作计算机信号吸光度分析。结·果 1.HGF在浓度为0一25n岁耐时对RMC增殖无影响(p>0.05);而HGF在浓度)50n扩耐时对RMC有明显的促进增殖的作用(p<0.05)。 2.RMC在基础水平只有微弱的MMP一2蛋白表达水平，且未检测到其活性，HGF在对RMC无增殖影响的浓度范围内对MMP一2的蛋白表达水平并无影响，但在HGF浓度为10一25n扩nil时可检测到其微弱的活性表达。 3.HGF在对RMC无增殖影响的浓度范围内对MMP一9的活性的影响呈浓度依赖性地增加，和对照组(on岁rril)相比在HGF浓度为25n群血时增加MMP一9活性57%(p<0.05)，但只轻度增加其蛋白表达水平，与对照组相比增加15%(p<0.05)。 4.HGF在对RMC无增殖影响的浓度范围内明显减少FN的蛋白表达水平，与对照组(On岁耐)相比在HGF浓度为25n扩nil时减少42%(p<0.05)。结论 1.HGF对RMC表达MMP一，一的活性及MMP一的蛋白表达水平有不同程度的促进作用。 2.HGF能下调RMC的FN蛋白表达水平。 3.提示HGF可能具有潜在的抗纤维化的能力，其可能机制是通过促进MMPs的表达来激活基质降解途径，以减少ECM成分的积聚，从而达到延缓肾小球硬化的进程。