【摘 要】
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背景:胃癌是世界范围内的最常见的癌症之一,患者死亡率高,被列为因癌症而死亡的第三大原因。对比早期与进展期的胃癌患者,早期患者胃癌切除术后5年生存率可高达90%,而进展期胃癌患者则接近10%,差异显著。因此,早期明确诊断对胃癌患者极为重要。众多研究均表明,环状RNA(circRNA)可能作为一种新的肿瘤相关因子和胃腺癌的潜在生物标志物。本课题筛选并验证与胃腺癌相关的目标circRNA,并初步探究其临
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背景:胃癌是世界范围内的最常见的癌症之一,患者死亡率高,被列为因癌症而死亡的第三大原因。对比早期与进展期的胃癌患者,早期患者胃癌切除术后5年生存率可高达90%,而进展期胃癌患者则接近10%,差异显著。因此,早期明确诊断对胃癌患者极为重要。众多研究均表明,环状RNA(circRNA)可能作为一种新的肿瘤相关因子和胃腺癌的潜在生物标志物。本课题筛选并验证与胃腺癌相关的目标circRNA,并初步探究其临床意义和功能。方法:(1)预实验阶段从送检的胃腺癌及其对应的癌旁组织中利用高通量芯片技术初步筛选出差异表达的circRNA,选出未被文献报道,且表达有2倍以上差异的circRNA分子作为目标基因;(2)组织中circRNA Hsacirc0000390表达水平检测:通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测目标circRNA Hsacirc0000390在80例胃腺癌组织与其配对癌旁组织中的表达水平,验证是否与芯片筛选结果一致,并结合临床病理资料进行统计分析;(3)构建Hsacirc0000390慢病毒过表达载体,采用慢病毒转导技术使胃腺癌细胞中circRNA Hsacirc0000390过表达,且使其表达升高较转导前升高达2倍及以上;(4)通过CCK-8测定细胞增殖、平板克隆测定细胞生长、Transwell实验测定细胞迁移等,初步探究circRNA Hsacirc0000390上调表达对胃腺癌细胞生物学功能的影响。结果:(1)前期芯片测定鉴定出胃腺癌组织中差异表达的713个circRNA,本课题从中筛选(差异表达2倍及以上)出的circRNA为Hsacirc0000390(芯片测定结果显示其在胃癌组织中低表达,与癌旁组织相比,低表达倍数为12.44倍),RT-qPCR结果进一步表明Hsacirc0000390在胃腺癌组织中的表达显著下调(下调率81.3%),差异显著(P<0.001)。(2)Hsacirc0000390分子在胃腺癌组织中表达量与患者临床病理TNM分期中的N分期具有相关性(P<0.05),与其它性别、年龄、肿瘤部位等临床病理资料均无明显相关性(P>0.05);(3)慢病毒转导使Hsacirc0000390在胃腺癌细胞株中表达上调,上调circRNA Hsacirc0000390的表达水平可抑制胃腺癌细胞的增殖、迁移及克隆形成能力(P<0.05)。结论:芯片及RT-qPCR均证实胃腺癌组织中circRNA Hsacirc0000390表达水平较其配对的癌旁组织下调。circRNA Hsacirc0000390在胃腺癌组织中表达量与患者的TNM分期中的N分期具有相关性(P<0.05)。上调circRNA Hsacirc0000390的表达水平可抑制胃腺癌细胞生物学行为(增殖、迁移及克隆形成能力)。因此,Hsacirc0000390在胃腺癌中可作为潜在的生物标志物。
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