诺西肽发酵工艺的研究

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本论文对诺西肽产生菌—活跃链霉菌及其发酵工艺条件进行了深入的研究,主要目的是优化诺西肽的发酵生产工艺,以适用于工业化生产的需要。 本论文首先通过自然分离确定了出发菌株YM4—2,然后,经过对培养基的初步考察,确定了适合该菌生长的分离(斜面)及种子培养基。 为了对活跃链霉菌的代谢产物诺西肽及其他相关物质进行定性和定量分析,在大量实验的基础上,建立了诺西肽萃取的工艺条件和检测发酵液中诺西肽含量的微生物效价测定法、薄层层析—紫外及生物显影法和高效液相色谱法。 通过试验建立了活跃链霉菌YM4—2最适的摇瓶发酵工艺条件:最适培养温度28~30℃,发酵周期4~5天,种龄27小时,接种量2.5~5%,装瓶量30ml/250ml三角瓶,发酵培养基消前pH为6.6~7.0。 本论文对发酵培养基进行了细致的考察。通过对碳源、氮源的考察确定了最适碳源为水解淀粉,最适氮源为黄豆粉。并利用均匀设计法对发酵培养基的组成进行了优化,利用该条件绘制了活跃链霉菌的代谢曲线。通过对补料工艺的考察进一步提高了诺西肽的产量。 本论文还考察了各种氨基酸对诺西肽生物合成的影响。丝氨酸、谷氨酸、谷氨酸钠对诺西肽的生物合成有明显的促进作用。半胱氨酸主要是通过促进次级代谢从而提高诺西肽的产量。初步考察了NH4+对诺西肽生物合成的抑制作用机制。 最后还通过薄层色谱法、高效液相色谱法和质谱法证明了发酵产物为诺西肽。
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