背景与目的舌鳞癌是头颈部最常见的恶性肿瘤,其恶性程度高,浸润性强,生长快,易发生早期淋巴结转移,且转移率较高。尽管近年来手术方式、放疗及化疗水平不断提高,但是由于其区域淋巴结转移率高,侵袭能力强,舌鳞癌患者术后复发率及死亡率依然很高,预后较差。因此,舌鳞癌细胞侵袭及转移机制的研究越来越受到诸多学者的广泛重视,尤其在分子水平上。近几年来,随着生物治疗的不断发展,分子靶向药物治疗作为其重要组成部分也受到广泛重视并逐渐兴起,有望将肿瘤的治疗推向一个前所未有的新领域。因此,着重从不同分子水平研究舌鳞癌细胞的侵袭、转移机制,及如何阻断这些过程将对提高舌鳞癌患者的生存率有着非常重要的现实意义。Versican是细胞外基质中无处不在的表达成分,属于外源凝集素家族,是一种分子量很大的硫酸软骨素蛋白聚糖。由一个蛋白核心和连接在其上的12~15个硫酸软骨素侧链所构成,包括一个氨基端的Gl亚基、一个羧基端的G3亚基和二者之间的软骨素侧链结合区域。Gl亚基由两个蛋白聚糖串联重复序列和一个免疫球蛋白类基序构成。G3亚基由一个互补结合蛋白基序、两个类表皮生长因子重复序列和一个碳水化合物识别区域构成。versican通过其带负电荷的硫酸软骨素侧链和Gl、G3区与其他蛋白的结合来调节细胞增殖、凋亡及侵袭等生物学行为。versican可以增强肿瘤细胞的增殖和侵袭能力已被许多研究证实。本研究首先通过免疫组化(SP法)方法,检测versican在不同临床病理学舌鳞癌组织及正常舌体组织中的表达情况,来探讨versican与肿瘤分化程度、临床分期等的关系,研究其与舌鳞癌发生发展及预后的关系。然后对人舌鳞癌细胞株Tca-8113进行体外培养,然后沉默Versican基因在舌鳞癌细胞株Tca-8113中的表达,观察versican基因沉默后Tca-8113细胞的生长、粘附、侵袭及迁移能力的变化,以研究versican对舌鳞癌细胞生物学行为的影响。以期能为舌鳞癌的生物治疗提出新的靶点。本研究包括以下两个部分:第一部分:Versican在舌鳞癌中的表达及意义材料与方法1,临床资料:随机选用郑州大学第一附属医院口腔颌面外科2012年1月-2015年1月经术后病理检查确诊为舌鳞状细胞癌的组织标本120例,全部病例均有明确的病理诊断及完整的临床资料。其中男性69例,女性51例;年龄28~75(53.4±4.5)岁;有区域淋巴结转移38例,无区域淋巴结转移82例;TNM分期(依据国际癌联UICC2002年分级分期标准):Ⅰ-Ⅱ期79人,Ⅲ-Ⅳ期41人;依据患者病历资料中的病理报告分级的组织学分级(G):高分化(G1)65人,中分化(G2)40人,低分化(G3)15人。另取正常舌体组织标本10例做为对照。2,方法:从Versican蛋白表达水平入手,应用免疫组化染色方法检测versican在120例不同临床病理学特征舌鳞癌组织及10例正常舌体组织中的表达水平。结果SP免疫组化结果:Versican阳性表达呈现为舌鳞癌细胞周围间质及少数癌细胞胞质呈棕黄色染色。Versican在10例正常舌组织中主要表达在血管周,均呈弱阳性,上皮细胞均呈阴性表达;Versican在120例舌鳞癌组织中主要表达在肿瘤间质中(高表达率56.67%),在舌鳞癌细胞中多呈阴性表达(阳性率8.33%)。versican的高表达率与舌鳞癌的组织学分级及临床分期有关,中-低分化及Ⅲ-Ⅳ期舌鳞癌组织中versican的表达水平更高(p(27)0.05);伴有区域淋巴结转移的舌鳞癌间质中versican表达水平更高,高表达率可达92.11%(p(27)0.05)。小结Versican在舌鳞癌组织中表达上调,且versican的表达可能与舌鳞癌的转移及预后有关。第二部分:沉默Versican基因对舌鳞癌细胞株Tca-8113细胞增殖、粘附、侵袭等生物学行为的影响材料与方法1,细胞株:人舌鳞癌细胞株Tca-8113细胞购于北京天恩泽生物技术公司。2,方法:1)人舌鳞癌细胞株Tca-8113的常规培养。2)将化学合成的versican-si RNA转染至人舌鳞癌细胞株Tca-8113。3)将实验分成三组:实验组(转染Versican-si RNA的Tca-8113细胞)、空白对照组(未进行任何转染的Tca-8113细胞)、阴性对照组(转染空载体的Tca-8113细胞)。4)荧光显微镜下观察转染效率;q RT-PCR检测转染后Versican m RNA的表达水平;最后应用MTT法、细胞粘附实验、划痕愈合实验及Transwell侵袭小室法分别检测versican基因沉默后Tca-8113细胞生长、粘附、迁移及侵袭能力的变化。结果1)荧光显微镜下观察转染效率大于70%,q RT-PCR检测结果显示,实验组Versican m RNA的水平下调,抑制率(0.23±0.03),与两对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。2)MTT法、细胞粘附实验、划痕愈合实验及Transwell侵袭实验结果表明,舌鳞癌Tca-8113细胞转染Versican-si RNA后,细胞的体外增殖、侵袭、迁移能力均较对照组有明显减弱,细胞粘附能力增强,差异均具有统计学意义(P<0.05)。小结舌鳞癌Tca-8113细胞转染Versican-si RNA后,Versican m RNA的表达水平下调;细胞的体外增殖、侵袭、迁移能力均较对照组有明显减弱,而细胞粘附能力明显增强。全文结论1)Versican在舌鳞癌组织中表达上调,且versican的表达可能与舌鳞状细胞癌的转移及预后有关。2)Versican-si RNA可体外有效干扰舌鳞癌Tca-8113细胞中versican m RNA的表达水平。3)沉默Versican基因的表达可体外明显抑制舌鳞癌Tca-8113细胞的增殖、侵袭和迁移能力,上调细胞粘附能力。