大肠杆菌Nissle 1917(EcN)是一种肠道益生菌,血清型为O6:K5:H1。在肠道中,EcN可以通过胞外的荚膜多糖抑制病原菌的定殖。此外,EcN荚膜多糖的主要成分是抗凝血药物肝素的前体物质,因此研究EcN荚膜多糖的合成途径具有重要的意义。本课题主要利用分子生物学技术,研究EcN菌株的荚膜多糖合成基因kfi A的功能,分析荚膜多糖的生物合成机理。提取、纯化EcN荚膜多糖,并通过1H核磁共振检测。确定了荚膜多糖的特征峰的化学位移约为2ppm。其次,通过λ-red重组系统成功构建kfiA突变株,对突变株的生长曲线进行测定发现kfi A基因的缺失并未明显影响菌体的生长。利用1H核磁共振检测EcN和EcNΔkfi A的荚膜多糖,发现kfiA缺失株不能合成荚膜多糖。为了对该结论进行进一步验证,我们又对kfiA突变株进行基因回补。再次利用核磁共振检测EcN、EcNΔkfiA、EcNΔkfiA IntΦ80::pAH162-KpsMP-kfi A以及EcNΔkfiA IntΦ80::pAH162的荚膜多糖,发现只有kfiA基因存在时,EcN菌株才能合成荚膜多糖。