胚鼠腹侧中脑组织联合胚肾组织脑内移植治疗帕金森病的实验研究

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目的:为提高移植的多巴胺能神经元的存活率和促进细胞生长,将胚鼠腹侧中脑组织(VM)和胚肾组织联合移植入PD大鼠脑内,观察其疗效,检测胚肾组织对移植DA细胞的作用,从而为PD临床治疗提供一定的实验依据.方法:该实验用神经毒剂6-OHDA单侧损毁SD大鼠左侧中脑被盖腹侧区(VTA)和黑质致密部(SNC)建立动物模型.取损毁后4周阿朴吗啡(APO)诱导健侧旋转210圈/30分钟的成功PD模型46只随机分为两个实验组:实验组 1:检测移植多巴胺能神经元的存活率,取孕14天胚鼠腹侧中脑组织和孕18天的胚鼠肾脏组织,分为VM1组(将VM组织预置于胚肾组织营养液中;N=6)和VM2组(将VM组织预置于DMEM营养液中;N=6),预置6小时后,将VM组织制成细胞悬液,用微量注射器立体定向植入PD大鼠毁损侧尾壳核,于移植后1天处死,进行TUNEL、TH染色和流式细胞仪检测.实验组 2:检测移植多巴胺能神经元的生长情况,分为VM单独移植组(N=12);VM和胚肾组织联合移植组(N=12);空白对照组(N=10).取孕14天胚鼠腹侧中脑组织和孕18天胚鼠肾脏组织,分别制成细胞悬液和组织块,用微量注射器立体定向植入PD大鼠毁损侧尾壳核,空白对照组不移植.动物分别存活3、6个月,存活期间每两周APO腹腔注射观察动物旋转行为变化并记录.所有动物均用4%多聚甲醛灌注取脑,分别进行TH和HE染色.结果:根据TUNEL、TH染色和流式细胞仪检测结果,VM1移植组较VM2移植组移植神经元凋亡率降低,凋亡细胞数减少,THir阳性神经元数量明显增多,证明胚肾组织确实具有营养作用,可明显提高移植后多巴胺能神经元的存活率.移植后3、6个月内,联合移植组和单独移植组大鼠旋转行为均较正常对照组减少,经统计学处理P<0.05.免疫组化和组织学观察联合移植组和单独移植组移植针道和针道周围都可见THir阳性细胞及THir阳性纤维,前者无论是细胞数量、细胞体积和纤维密度均大于或高于后者.结论:1、胚肾组织具有明显的营养作用.2、胚肾组织能够明显减少移植神经元凋亡,促进移植神经元的存活.3、胚肾组织能够长期分泌营养因子增大DA神经元体积并促进其轴索延伸,增加宿主纹状体内DA纤维的突触联系.
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