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目的:异基因造血干细胞移植(Hematopoietic stem cell transplant,HSCT)是治疗血液肿瘤的最佳手段之一,移植物抗宿主病(Graft-Versus-Host Disease,GVHD)是移植术后的主要并发症,严重影响了移植的成功率和患者安全。移植物抗宿主病分为急性和慢性,急性移植物抗宿主病(Acute Graft-Versus-Host Disease,aGVHD)进展快,病情危重,导致移植后患者的早期死亡。慢性移植物抗宿主病(Chronic Graft-Versus-Host Disease,cGVHD)迁延不愈,病程甚至长达数年,病程长,严重影响患者的生存质量。目前GVHD的诊断主要依据临床症状及病理活检,但临床症状缺乏特异性,病理活检的有创性,严重影响了GVHD的早期诊疗。血清生物标志物的筛查简单快速易行,具有无创性,而且生物标志物的表达水平变化可以反映机体的病理免疫状态,有利于对GVHD发病的预警以及对机制的研究,因此,进行GVHD血清特异性生物标志物检测对早期诊断和治疗具有重要的临床参考价值。方法:1.建立GVHD小鼠模型:选用SPF级雄性C57BL/6(H-2b)小鼠作为供体鼠,取股骨、胫骨骨髓和脾脏;SPF级雌性BALB/C(H-2d)小鼠作为受体鼠。经650 cGy 60Coγ线行全身辐照。然后分为对照组及aGVHD组(实验组)两组。对照组小鼠在尾静脉注射供体鼠骨髓细胞5x10^6/只,aGVHD组小鼠(实验组)另外加入供体鼠脾脏细胞1x10^6/只。2.在aGVHD动物模型中检测10种生物标志物的表达水平动态变化,筛选出与急性GVHD相关的特异性生物标志物。选取我中心发生急性GVHD和没有发生急性GVHD的患者各20例,运用蛋白质芯片技术检测及验证10种生物标志物在GVHD患者中的临床意义,探索生物标志物在急性GVHD发病中的价值。3.选取我中心发生慢性GVHD的30例患者,没有发生慢性GVHD的60例患者,运用液相悬浮芯片技术检测患者的12种生物标志物的表达水平变化。筛选出与慢性GVHD相关的特异性生物标志物,并且评价生物标志物在GVHD的发生发展,疾病严重程度,不同靶器官中的意义。结果:1.经650 cGy 60Coγ线全身辐照,实验组的受体鼠中加用供体鼠骨髓细胞+脾脏细胞后,移植后第14天,FISH技术检测小鼠的供体干细胞成功植入,实验组小鼠出现脱毛,体重下降,弓背,腹泻等GVHD表现。2.通过10种特异性生物标志物的检测,与对照组相比较,aGVHD小鼠模型和急性GVHD患者中均发现IL-2,TLR4表达水平显著增高(P<0.05),TGF-β同时在急性GVHD小鼠和患者中表达水平明显下降(P<0.05)。3.通过对12种生物标志物的检测,与对照组相比较,慢性GVHD患者中观察到CXCL9,CXCL13,CCL11,CCL17,MPIF-1/CCL23表达水平显著增高(P<0.05),CXCL13,CCL17在重度cGVHD的患者中表达水平显著高于对照组(P<0.05),CXCL9在皮肤、CCL17在肝脏中的表达明显增高且具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.受体鼠经650 cGy 60Coγ线全身辐照,用供体鼠骨髓细胞+脾脏细胞输注的方法可以成功构建aGVHD小鼠模型。2.IL-2,TLR4,TGF-β这三种生物标志物可作为早期预测、诊断急性GVHD发生的特异性生物标志物,对临床应用有参考价值。3.CXCL9,CXCL13,CCL11,CCL17,MPIF-1/CCL23五种生物标志物联合可以作为早期诊断、评估慢性GVHD发生的特异性生物标志物;其中CXCL13,CCL17可以作为预测重度cGVHD发生的特异性生物标志物;CXCL9,CCL17可以为不同靶器官损害提供辅助参考。