富有柿与次郎柿组织培养技术的研究

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本研究以甜柿(Diospyros kaki Thunb)品种富有柿(Fuyu)与次郎柿(Jiro)为材料,系统地研究了两品种的组培快繁、组培苗叶片和根段的不定芽再生、愈伤组织的诱导和不定芽的分化、不定根的诱导等技术,以期为柿果的转基因技术奠定基础,同时也为富有柿与次郎柿苗木的快速繁殖提供技术依据。 1、采用L9(34)三因素、三水平的正交试验方法,研究了基本培养基、激素种类及其浓度对“富有”、“次郎”2个甜柿品种组培快繁效果的影响。结果表明DKW的快繁增殖效果优于MS培养基,WPM效果最差,不适合于2种甜柿的组培快繁。富有柿的最佳培养基为ZT 1.0 mg/L+IAA 0.1mg/L的DKW培养基;在含ZT 2.0 mg/L的培养基中,次郎柿的有效新梢较高,但组培苗基部的愈伤组织明显增大,不利于苗的生长,比较适宜于次郎柿的培养基是ZT 1.0 mg/L+BA 0.5 mg/L+IAA 0.1mg/L的DKW培养基。 2、比较了不同激素种类、浓度及其培养时间,对富有柿与次郎柿的叶片愈伤组织诱导和不定芽再生的影响。TDZ有很强的诱导刺激叶片愈伤组织和不定芽再生的能力,愈伤组织和不定芽分化率达90%以上。将在1/2DKW+TDZ 0.5 mg/L诱导形成的带有不定芽的愈伤组织切割成小块,接种到不含TDZ的培养基MS(1/2N)+ZT 1.0mg/L+IAA 0.1 mg/L中培养,富有、次郎的不定芽分化率均达98%,平均不定芽数分别为7.8和5.6。 3、富有柿根段接入1/2DKW+ZT 2.0 mg/L培养基中,分化率90.9%,平均不定芽数达到6.7;次郎柿根段接入1/2DKW+ZT 4.0 mg/L培养基中,分化率100%,平均不定芽数达到6.3。 4、富有柿与次郎柿组培苗在组织培养早期,在1/2MS培养基中生根率较高,达到80%以上;组培苗经过较长时间的离体培养后,组培苗在1/2MS和1/2MS(1/2N)中的生根率无明显差异。IBA对富有柿与次郎柿组培苗的生根效果好于IAA;培养基中附加IAA后,组培苗的生根率约70%,而附加IBA后,生根率可以达到90%以上。 5、由根段再生的富有柿与次郎柿不定芽的生根率可达到100%,较快繁组培苗的生根率显著提高,但随着继代次数的增多,根段再生苗的生根能力逐渐下降,六次继代后根段再生苗的生根能力与继代苗基本相同。
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