掌叶半夏脱毒及快繁体系建立

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掌叶半夏,又名虎掌南星,天南星科半夏属多年生草本植物,是天南星药材的主要栽培种,生产上极易感染病毒,不利于保持和提高药材的品质和产量。本文对掌叶半夏田间病毒发生情况进行了调查,利用RT-PCR法对病株的病毒种类进行了检测。以掌叶半夏微茎尖为外植体,研究了茎尖大小、激素浓度、培养基成分对掌叶半夏脱毒效果的影响以及影响无病毒苗快速繁殖的因素等。建立了掌叶半夏脱毒快繁体系,在短期内繁殖一定量的脱毒苗用于生产,以确保掌叶半夏种植的稳定性和效益。主要研究结果如下:  1、DsMV和CMV是侵染安国地区掌叶半夏栽培品种的主要病毒,检出率分别为72%、38%,其中CMV和DsMV复合侵染率高达38%。  2、茎尖大小是影响茎尖成活和脱毒效果的主要因素。0.1~0.2 mm大小的茎尖在MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L培养基上培养25 d可恢复生长,DsMV、CMV脱除率均可达100%,但成活率只有26.7%;0.7~0.9 mm大小的茎尖,成活率为80.0%,但病毒脱除率降低,DsMV、CMV脱除率分别为60.0%、73.3%。综合茎尖成活率和脱毒率的负相关关系,选择0.2~0.5 mm大小的茎尖是进行掌叶半夏脱毒快繁的最适外植体,成活率为53.3%,DsMV、CMV脱除率分别为76.7%、100%。  3、培养基成分是影响茎尖成活的另一重要因素。提高MS基本培养基中NH4+、K+含量对掌叶半夏茎尖成活有较大的促进作用,附加247 mg/L NH4+或391 mg/L K+可分别提高0.2~0.5 mm大小的茎尖成活率至86.7%、73.3%。  4、MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L为掌叶半夏茎尖愈伤组织诱导最适宜激素组合,诱导率为46.7%,同种培养基上继续培养,可诱导不定芽分化(分化系数为6.93),不定根形成,一次性成功诱导形成试管苗,移栽成活率高达100%。  5、激素浓度、蔗糖浓度、多效唑浓度和温度对离体块茎的形成及膨大有较大影响。正交试验结果表明,MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.5 mg/L+GA30.5 mg/L组合最有利于离体块茎的形成和发育,诱导率最高,为86.7%,每株鲜重增加量为2.8g,芽数为9.0个;促进块茎膨大的最适宜蔗糖浓度为60 g/L,培养60 d,离体块茎鲜重增加量为0.50 g;最适宜的多效唑浓度为6 mg/L,培养60 d,离体块茎鲜重增加量为0.40 g;最适宜的温度为20℃;培养4周,离体块茎鲜重增加量为0.73 g。  本研究明确了掌叶半夏田间病毒类型和感病率,建立了“一站式”微茎尖培养脱毒体系为:以0.2~0.5 mm茎尖为外植体,于MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L培养基上接种和再生,可有效脱除DsMV和CMV。添加247mg/L NH4+或391mg/LK+有助于茎尖成活。同时建立了掌叶半夏脱毒苗快速繁殖体系:将脱毒试管苗在MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5 mg/L+ GA30.5 mg/L+蔗糖60 g/L+多效唑6 mg/L培养,离体块茎诱导率和芽数最高。
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