鸡持续冷应激启动Nrf2抗氧化信号转导路径的研究

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:liongliong459
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持续性冷应激通过复杂的生理生化途径严重影响家禽的生长发育和生产性能的发挥,增强鸡的抗冷应激能力是培育抗逆性品种的重要育种性状之一。本研究以6周龄淮南麻黄鸡公鸡为试验动物,取其肝脏组织体外培养细胞,经核因子E2相关因子2(Nuclear factor erythroid-2p45-relatedfactor2,Nrf2)的抑制剂——Kelch样ECH相关蛋1(Kelch-like ECH-associated protein1,KEAP1)处理后,利用染色质免疫共沉淀结合深度测序(Chromatin immunoprecipitation sequence,CHIP-Seq)和免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,CoIP)新技术,探讨在持续低温胁迫下,其肝脏细胞Nrf2抗氧化信号转导反应路径。结果如下:1.通过灌流鸡的肝脏组织获得的鸡肝脏细胞,运用贴壁培养法培养于10cm培养皿,生长至80%左右,细胞呈现扁平多边形。2. CHIP-Seq获得的富集DNA与鸡全基因组序列比对,测序片段广泛分布于1、2、3、4、w和z染色体上,序列经基序分析获得12bp的转录区结合位点。3. CHIP-Seq测序结果与鸡全基因组序列比对,其可能相关基因经GO富集分析和KEGG Pathway分析,获得具有多个功能和存在于多条通路的基因,其中在抗氧化应激通路上的相关基因主要有VAT1L、TYRP1、TPH2、KCNAB1、HAAO、EFCBP1、DHRS11、CYP2H1、CYP1A4、ALDH1A1共10个。4.选择特异性鸡源抗体——抗TPH2蛋白用于CoIP分析,质谱分析结果表明,TPH2的下游结合蛋白主要为fatty acid binding protein liver(127AA),占总蛋白量的6.7%。研究结果提示,在持续低温条件下,淮南麻黄鸡启动Nrf2抗氧化信号级联反应,其反应通路可能为Nrf2-TPH2-LFABP,以抵冷应激诱导产生的抗氧化应激损伤。
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