拟南芥类受体激酶基因编码序列克隆及RLCK561的功能研究

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受体激酶在动植物体内参与调控多种信号途径,包括细胞分裂、分化、死亡及病原菌介导的免疫防御反应,进而调控其生长发育。在模式植物拟南芥中,至少存在610个受体激酶,组成一个超基因家族,但到目前为止只揭示了其中少部分成员的功能。为了进一步研究这些重要基因的生物学功能,本研究利用Gateway技术大规模克隆了除LRR家族外的377个RLK基因的编码区(CDS)序列,并通过遗传学和分子生物学方法初步研究了其中一个胞质受体激酶(RLCK)的生物学功能。本研究将227个受体激酶的完整CDS序列克隆到pDONR/Zeo载体中,获得入门克隆。其中179个克隆序列与TAIR数据库中的预测序列一致,48个克隆序列与预测序列存在差异,可能是由mRNA的可变剪接造成的。有21个基因预测的部分内含子在克隆到的序列中为外显子;有15个基因克隆到的序列中缺少部分预测的外显子;有7个基因预测的部分内含子和外显子都发生了变化。本文初步研究了RLCK VIII家族基因的生物学功能,获得了一个具有稳定遗传表型的rlck561突变体,该突变体具有明显的胚胎异常表型。遗传杂交、突变体胚胎透明观察和花粉染色等实验结果暗示,在受精过程中突变体精卵细胞识别或结合过程可能存在问题而导致缺陷表型。本文为后续研究其他受体激酶基因的功能提供了资源:所揭示的RLCK561功能对于进一步阐释被子植物双受精和胚胎发育的分子机理具有重要意义。
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