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糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM) 肾脏微血管并发症,典型病理改变为肾小球硬化症,在我国也已是构成ESRD常见的病因之一。国内外肾脏病学者在不断探索糖尿病肾病的发病途径及治疗方法,而中医药以其独特的优势,在糖尿病肾病的防治中,占有重要地位。赵玉庸教授根据中医传统理论和多年肾病治疗经验,以益气活血,化瘀通络为治法,针对大多数糖尿病肾病患者基本病理改变,以化瘀通络药物为主,配以黄芪组成纯中药复方制剂—肾络通,治疗糖尿病肾病患者,取得了良好的临床疗效。肾小球足细胞附着于基底膜(GBM)外侧,它既能产生GBM 网络状框架主要成份之一IV 型胶原α5 链,又能产生以IV 型胶原为主要降解底物的明胶酶(MMP2、MMP9), 以维持GBM 中IV 型胶原含量的动态平衡,从而保持GBM 结构和功能的完整性。病理状况下,足细胞生成和降解IV 型胶原的能力失衡,必然会引起肾小球基底膜结构破坏和功能障碍,因此足细胞在糖尿病肾病发生发展过程中的作用近来受到特别关注。1997 年随着体外足细胞培养成,使开展足细胞在糖尿病肾病中的作用机理研究成为可能。目的:本试验通过研究高糖持续刺激对足细胞产生MMP9、IV 型胶原α5 链的影响及其可能的信号途径、转录因子,肾络通药物血清对高糖诱导足细胞分泌MMP9 的影响,探讨肾络通治疗糖尿病肾病的可能作用机制。 第一部分高糖对足细胞产生MMP9 及IV 型胶原的调节作用 方法:小鼠足细胞系分为正常糖组、高糖组和高渗对照组(甘露醇)。应用明胶酶谱法观察三组细胞培养液上清1～10d 明胶酶活性的动态变化,RT-PCR 方法检测MMP9mRNA 0d、2d、5d 的表达,Western 印迹分析法检测细胞培养液上清中1～7d IV 型胶原α5 链蛋白水平。