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本文研究目的:骨性关节炎和软骨缺损后自身修复能力有限,常因无力承担各种应力而退变,临床疗效不佳。目前,关于促进关节软骨缺损的修复、提高修复质量方面的研究颇多,但没有一种方法能高质量的修复关节软骨缺损,并达到很好的远期疗效。寻求一种新的方法和手段提高本病疗效已成为必需。
研究材料与方法:
1.建立软骨细胞体外培养体系,甲苯胺蓝染色进行软骨细胞鉴定采用两步法进行软骨细胞分离、培养和传代。并用甲苯胺蓝染色行细胞鉴定。
2.人参皂甙Rg1、Rb1对软骨细胞增殖和蛋白合成的影响设人参皂甙Rg1、Rb1高、中、低剂量组,对照组和空白组。运用MTT法和Bradford蛋白检测法检测人参皂甙对软骨细胞合成代谢的促进作用。
3.人参皂甙Rg1、Rb1对IL-1诱导软骨细胞凋亡的抑制作用建立软骨细胞凋亡模型,流式细胞术、Hoechst检测和透射电镜对软骨细胞凋亡进行定量、定性、形态和细胞超微结构观察。
研究结果:
1.建立软骨细胞体外培养体系和细胞鉴定消化时间为(6.17±1.63)h,细胞获得率(1.43±0.24)×105/100mg,存活率(84.17±5.08)%,24h贴壁率(59.17±7.36)%。
2.人参皂甙Rg1、Rb1对软骨细胞增殖及蛋白合成的促进作用人参皂甙Rg1、Rb1明显促进细胞增殖和蛋白合成,细胞饱满,折光度好,分泌大量基质,形成软骨样组织。Bradford蛋白定量检测人参皂甙组蛋白合成量明显高于对照组;Rg1促进蛋白合成能力明显高于Rb1。
3.人参皂甙Rg1、Rb1对IL-1诱导的软骨细胞凋亡的抑制作用人参皂甙Rg1、Rb1能明显抑制IL-1介导的软骨细胞凋亡,两组之间无明显差异性。人参皂甙的这种保护作用在细胞形态学和超微结构上得到直接证明。
研究结论:合适浓度的人参皂甙Rg1、Rb1能明显促进体外培养软骨细胞的增殖和蛋白的合成;人参皂甙Rg1m、Rb1m抑制白介素-1介导引起的细胞凋亡,有效地保护软骨细胞,达到防止软骨退变的目的,但两者之间无明显差异。