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目的:多发性硬化(Multiple Sclerosis, MS),是累及中枢神经系统(CNS)的一种慢性炎症性脱髓鞘性疾病,发病机制尚不明确。大多数研究表明,免疫损伤和氧化应激在MS的发病机制中起重要作用。Nrf2/ARE通路的激活能够保护机体免受免疫及氧化应激的损伤,本课题组前期应用Nrf2通路的经典激活剂莱菔硫烷初步证实了激活此通路能够降低EAE发病率以及减轻疾病严重程度。而莱菔硫烷尚未用于临床,我们希望通过实验,从已经用于临床的Nrf2通路激活性药物中筛选出抗氧化、调节免疫等方面可以跟莱菔硫烷媲美的药物,从而为MS的治疗提出新的药物。马索罗酚是一种化疗药物,丹参酮IIA常用于冠心病的治疗,此两者都被证实具有Nrf2通路激活剂的作用,本实验利用实验性自身免疫性脑脊髓炎(ExperimentalAutoimmune Encephalomyelitis, EAE)小鼠的脾细胞,研究马索罗酚和丹参酮IIA对EAE小鼠脾细胞中抗氧化酶、细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17A的表达的调节作用,初步探讨马索罗酚和丹参酮IIA对EAE的抗氧化和免疫调节作用,一方面希望为MS的治疗提出新的药物,另一方面希望能挖掘这两种药物在调节免疫方面的特性。方法:选择8只C57BL/6雌性小鼠,周龄8-10周,体重18-22g,利用MOG35-55多肽、结核杆菌、完全弗氏佐剂、百日咳毒素等对小鼠进行免疫制作成EAE模型,每天2次对其进行神经功能的评分,于发病高峰(8分及以上,约免疫后20天)随机选择5只处死,在无菌的环境中取出脾脏,并用10%胎牛血清的RPMI1640无菌培液制备成单细胞悬液(细胞密度控制在5*106/L左右),并给予MOG35-55多肽进行再刺激。将此细胞悬液随机分为对照组、莱菔硫烷组、马索罗酚组和丹参酮IIA组,空白对照组加入无菌DMSO(0.6l/200ul)莱菔硫烷组加入莱菔硫烷稀释液(0.9g/ml)马索罗酚组加入马索罗酚稀释液(6.0g/ml)丹参酮IIA组加入丹参酮IIA稀释液(3.0g/ml),保证所有组的DMSO含量均≤0.3%。将4组细胞悬液培养24小时后离心,利用Western blot的方法检测细胞沉渣中的Ⅰ型血红素氧化酶HO-1,采用ELISA的方法检测上清液中的IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17A的表达水平。结果:1小鼠脾细胞中HO-1表达情况:莱菔硫烷组、马索罗酚组、丹参酮IIA组EAE小鼠脾细胞与对照组相比,HO-1的表达明显增多,差异均具有统计学意义(P<0.05)。丹参酮IIA组HO-1表达明显高于莱菔硫烷组及马索罗酚组(P<0.05);莱菔硫烷组与马索罗酚组HO-1表达相比,差异无统计学意义(P>0.05)。2上清液中IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17A的表达情况:莱菔硫烷组、马索罗酚组、丹参酮IIA组与对照组相比,IFN-γ的表达无明显统计学差异(P>0.05);IL-4、IL-10的表达明显增多,差异均具有统计学意义(P<0.05);IL-17A的表达明显减少,差异均具有统计学意义(P<0.05);莱菔硫烷组、马索罗酚组及丹参酮IIA组IL-4、IL-10、IL-17A的表达相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1马索罗酚、丹参酮IIA都能够上调EAE小鼠脾淋巴细胞中的IL-4、IL-10等抑炎因子的表达,下调促炎因子IL-17A的表达,具有调节免疫平衡的能力。2马索罗酚、丹参酮IIA能够上调EAE小鼠脾淋巴细胞中的HO-1的表达,具有抗氧化的能力。