小鹅瘟(Gosling plague，GP)是由细小病毒科细小病毒属中的鹅细小病毒(Goose parvovirus，GPV)引起的鹅的一种烈性传染病，主要发生于1月龄以内雏鹅和雏番鸭，以急性肠炎及肝、肾、心等实质脏器炎症为主要特征。该病病程短，传染性强，死亡率高。在欧洲、亚洲等许多国家相继都有发生的报道，给水禽养殖业造成了巨大的经济损失。 小鹅瘟的病原为鹅细小病毒，核酸为单链、线性DNA，大小约为5Kb。病毒外观呈现圆形或六角形，直径大约20～25nm，含有正股DNA的病毒粒子和负股DNA的病毒粒子的数目基本相等。鹅细小病毒基因组中含有2个主要开放阅读框架(ORF)，左侧OPF(LORF)编码非结构蛋白(NS)，右侧ORF(RORF)编码3种结构蛋白(VP)：VP1、VP2和VP3，分别由732、587和534个氨基酸组成。Zadori等对GPV的氨基酸序列进行分析发现，暴露于衣壳表面的氨基酸序列均出现在VP3内，是病毒核衣壳的主要成分，约占总蛋白含量的80％。VP3基因全长1605bp，编码534个氨基酸，具有高度保守性，能够诱导机体产生中和抗体，是GPV主要保护性抗原。 目前，控制小鹅瘟的爆发和流行主要使用高免血清和传统疫苗。但是这些制剂本身存在问题，例如高免血清利用成年鹅制备血清产量低，成本高，易导致某些鹅源性传染病的垂直传播和人为扩散的缺点，同时异源的血清对鹅是一种抗原，诱导产生抗体，易发生排异，影响抗血清在鹅体内的中和保护作用，造成保护时间短的缺点；弱毒苗对细小病毒病的预防和控制起到一定的作用，但是不足以防制鹅细小病毒的大流行而强毒疫苗容易发生毒力返祖，一般不使用。所以，迫切需要研制一种新型的疫苗，用以预防和控制小鹅瘟的爆发和流行。 核酸疫苗的出现为小鹅瘟的预防和控制提供了一种新的途径。核酸疫苗(nucleic acid vaccine)系将外源抗原基因插入真核表达载体，构建重组载体，直接种于动物机体，导入宿主的靶组织中，外源基因表达特异的蛋白抗原，与宿主细胞MHC-Ⅰ类或MHC-Ⅱ类抗原分子结合，刺激免疫识别系统，从而引发特异性体液免疫和细胞免疫应答，而达到预防和治疗疾病的目的。近年来，核酸疫苗发展迅速，许多研究者将不同病原的保护性抗原基因导入动物体内，引起特异性免疫应答，并已在一些疾病如流感、乙肝、艾滋病、牛疱疹病毒感染结核病等取得初步结果。这为鹅细小病毒基因疫苗的研制提供了参考依据。 本实验选用鹅细小病毒四平分离珠VP3基因为候选基因，利用碱裂解法提取GPV基因组DNA。应用Primer5.0在VP3基因两侧设计一对引物P1/P2，利用聚合酶链式反应从GPV基因组DNA扩增出VP3基因片段。将VP3基因与克隆载体pMD18-T连接，转化到感受态大肠杆菌JM-109中进行克隆。对所提质粒进行快速鉴定、PCR