体细胞胚胎发生相关类受体蛋白激酶(somatic embryogenesis receptor-1ike kinase,SERK)基因在胡萝卜、水稻等草本植物以及可可等木本植物的体细胞胚早期发生过程形成的胚性愈伤组织中均为特异性表达,被认为是植物胚性愈伤组织早期发生的分子标记之一。本研究以牡丹品种‘凤丹白’试管苗叶柄诱导形成的愈伤组织为材料,在已从牡丹中克隆得到Ps SERK基因的基础上,构建Ps SERK基因的过表达载体,通过农杆菌介导的遗传转化体系分别将其转入模式植物拟南芥和牡丹愈伤组织中,并对转化植株进行初步鉴定。为下一步通过芯片技术和表达分析技术对该基因进行功能分析及鉴定奠定基础。主要研究结果如下:1牡丹Ps SERK基因全长的PCR扩增通过RT-PCR扩增的方法从牡丹品种‘凤丹白’鳞芽诱导的愈伤组织中扩增得到Ps SERK基因全长,测序结果表明其c DNA序列与Genebank登录序列相似性达98.67%,编码的氨基酸序列与Genebank登录序列相似性达98.72%。2 Ps SERK基因过表达载体的构建并转化农杆菌根据表达载体构建方案,先对PBI221和p CAMBIA1301大肠杆菌DNA质粒进行双酶切,构建中间克隆载体p CAMBIA1301-35S-NOS,再对p CAMBIA1301-35S-NOS和Ps SERK基因DNA质粒进行双酶切,构建Ps SERK过表达载体,并采用冻融法成功将构建好的过表达载体质粒转入农杆菌LBA4404、GV3101中。3农杆菌介导转化拟南芥通过floral dip农杆菌花序侵染法将Ps SERK过表达载体转入拟南芥中,经初步筛选得到具有Hyg抗性的转化苗,并进行表型鉴定和PCR检测,验证了过表达载体的正确性。同时,对常用的农杆菌LBA4404和GV3101进行筛选,结果发现GV3101更适合作为拟南芥遗传转化的菌种材料;还对拟南芥进行了潮霉素敏感性测试,考察拟南芥对不同浓度Hyg的耐受情况,结果表明拟南芥较适宜的Hyg筛选浓度为25 mg·l-1。4农杆菌介导的牡丹愈伤组织遗传转化按照已初步建立的牡丹愈伤组织遗传转化体系,将Ps SERK过表达载体转入牡丹愈伤组织中,采用GUS基因组织化学染色法进行染色,试验结果成功检测到GUS瞬时表达活性,愈伤组织碎块呈蓝色,表明愈伤组织中存在GUS活性位点,初步表明Ps SERK过表达载体已转入牡丹愈伤组织中。