【摘 要】
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目的:研究蒲公英提取物（DE）在脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞和硫酸铜（CuSO4）诱导的斑马鱼幼虫中的抗炎作用及其机制。方法:在体内外实验中,设置分组:对照组、LPS组/CuSO4组、DE组。1.提取蒲公英,采用超高效液相色谱法（UPLC-QE-Orbitrap-MS）分析DE的成分;2.体外培养RAW264.7巨噬细胞,MTT法检测DE对RAW264.7细胞的细胞毒性,倒置显微
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目的:研究蒲公英提取物（DE）在脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞和硫酸铜（CuSO4）诱导的斑马鱼幼虫中的抗炎作用及其机制。方法:在体内外实验中,设置分组:对照组、LPS组/CuSO4组、DE组。1.提取蒲公英,采用超高效液相色谱法（UPLC-QE-Orbitrap-MS）分析DE的成分;2.体外培养RAW264.7巨噬细胞,MTT法检测DE对RAW264.7细胞的细胞毒性,倒置显微镜分析细胞形态的变化,用酶标仪检测RAW264.7细胞一氧化氮（NO）生成量;3.荧光显微镜检测RAW264.7细胞活性氧（ROS）荧光强度和细胞凋亡情况,采用流式细胞术分析RAW264.7细胞周期,定量逆转录聚合酶链反应（RT-q PCR）检测RAW264.7细胞M1表型基因诱导型一氧化氮合酶（i NOS）、白介素（IL）-6、IL-1β和M2表型基因IL-10、CD206表达水平;4.观察DE对斑马鱼幼虫生存率的影响,荧光显微镜检测斑马鱼幼虫活性氧（ROS）荧光强度和中性粒细胞的聚集,RT-q PCR检测斑马鱼幼虫炎症基因i NOS、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-6、IL-10等的表达水平。结果:1.UPLC-QE-Orbitrap-MS分析得到406个可能的DE成分;2.MTT结果表明,低于75μg/m L浓度的DE对RAW264.7细胞无毒性作用（P＜0.05）,进一步实验显示DE抑制了LPS诱导的细胞形态改变,同时减少了LPS诱导的RAW264.7细胞NO生成（P＜0.05）;3.DE抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞活性氧（ROS）的产生以及凋亡（P＜0.05）,经流式细胞仪检测发现,LPS刺激24 h诱导了巨噬细胞G0/G1期阻滞,DE解除了巨噬细胞G0/G1期阻滞（P＜0.05）,而LPS刺激6 h未能诱导巨噬细胞G0/G1期阻滞,但促进G2/M期增殖（P＜0.05）。RT-q PCR结果表明,DE明显降低了LPS诱导的M1表型（IL-1β、i NOS和IL-6）m RNA在RAW264.7细胞中的表达水平（P＜0.05）,而DE明显增加了M2表型（CD206、IL-10）m RNA的表达水平（P＜0.05）;4.斑马鱼幼虫实验中,低于25μg/m L浓度的DE对斑马鱼幼虫无毒性（P＜0.05）,同时发现DE抑制CuSO4诱导的斑马鱼幼虫ROS生成以及中性粒细胞的聚集（P＜0.05）,RT-q PCR结果显示DE减少了斑马鱼幼虫炎症基因（i NOS、TNF-α、IL-6和IL-10）m RNA的表达水平（P＜0.05）。结论:DE通过调节RAW264.7细胞的极化和凋亡来减少LPS诱导的炎症反应,同时,DE可以减少CuSO4诱导的斑马鱼幼虫的炎症反应。
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