【摘 要】
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MDM2（Mouse Double Minute 2）作为人体内p53蛋白重要的的负调控因子,在非p53突变型肿瘤细胞中过表达会导致p53的抑癌作用失活。pb13是以MDM2为靶标通过多肽噬菌体库筛选出来的一种二硫键介导的二元环肽,没有特征二级结构但具有刚性的分子骨架,该骨架可以用来有效设计蛋白结合配体以及新型的多肽药物。本论文应用核磁共振技术（NMR）和蛋白质晶体学的方法研究了MDM2蛋白与二元
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MDM2（Mouse Double Minute 2）作为人体内p53蛋白重要的的负调控因子,在非p53突变型肿瘤细胞中过表达会导致p53的抑癌作用失活。pb13是以MDM2为靶标通过多肽噬菌体库筛选出来的一种二硫键介导的二元环肽,没有特征二级结构但具有刚性的分子骨架,该骨架可以用来有效设计蛋白结合配体以及新型的多肽药物。本论文应用核磁共振技术（NMR）和蛋白质晶体学的方法研究了MDM2蛋白与二元环肽pb13的相互作用,为以MDM2为靶标的新型多肽药物的研发提供了一种新的可能。首先,我们构建了 MDM2的两个片段（氨基酸残基17-125、17-108）和pb13的表达质粒。经大肠杆菌表达系统表达后通过一系列的纯化过程获得了 MDM2（17-125）和 MDM2（17-108）蛋白。其次,制备了 MDM（17-125）-pb13 和MDM（17-108）-pb13两种蛋白质复合物用于蛋白质晶体学实验,获得了 MDM2（17-108）-pb13蛋白复合物晶体,并收集到了 3 A分辨率的衍射数据解析了复合物晶体结构。晶体结构揭示了 MDM2蛋白通过疏水相互作用与pb13结合,这种相互作用的方式与MDM2-p53的作用模式类似。最后,对MDM2（17-125）进行了 13C/15N同位素标记。通过核磁滴定实验初步确定了 MDM2上与pb13相互作用的位点。发现MDM2（17-108）区域是与pb13相互作用的重要区域。
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