目的：核纤层及核纤层蛋白能维持细胞的正常核形态及生物学功能。细胞中不能被加工或截短的核纤层蛋白堆积导致DNA损伤修复缺陷和衰老加速。核纤层蛋白及其结合蛋白正成为细胞衰老研究的重要对象。前期研究发现，A型核纤层蛋白前体(prelamin A)的特异性识别因子Narf(nuclear prelaminArecognition factor,Narf)在细胞中与prelaminA能较好地共定位于核纤层，Narf蛋白的C端386～456aa可能为相互结合的非必需区，过表达Narf后的初步结果显示衰老细胞增多。本文拟进一步用荧光共定位方法证明Narf蛋白的C端386～456aa区域对于与prelamin A结合是非必需;检测金属蛋白酶Zmpste24敲除小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts，MEFs)中Narf的定位;检测Zmpste24-/-和lamin A编码基因LMNA敲除（LMNA-/-）细胞中Narf的表达水平;探讨Narf过表达和干扰细胞中活性氧(Reactive oxygen species，ROS)水平的变化，以期揭示prelaminA堆积和缺失引起的细胞衰老是否通过Narf和ROS的改变来实现。　　 方法：构建N端(1-78aa)或C端(386-456aa)截短的Narf突变体融合表达载体pEGPP-N1-NarfBC和pEGPP-N1-NarfAB，与带有红色荧光标记的prelamin A共同转染人胚胎肾细胞（HEK293T），荧光显微镜下观察Narf的突变体与prelaminA的共定位情况;免疫荧光方法检测Narf在Zmpste24-/-MEFs中定位与对照相比是否发生改变;用Western blotting和qRT-PCR检测Zmpste24-/-和LMNA-/-MEFs中Narf的表达情况，并检测prelamin A，laminA及progerin过表达的HEK293T细胞中Narf的水平;在HEK293T中过表达或干扰Narf的表达，用酶标仪检测细胞中ROS水平，并用Western blotting检测细胞中超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)水平。　　 结果：C端386-456aa截短的Narf突变体主要集中分布在细胞核中，与prelamin A能共定位于核纤层，但共定位荧光偏弱。N端1-78aa缺失的Narf突变体与prelaminA完全不能共定位，前者主要分布于细胞质中，后者则集中于细胞核。原位杂交结果显示Zmpste24-/-MEFs中Narf分布于细胞核和细胞质中，而对照野生型细胞中Narf分布在细胞核中。Zmpste24-/-MEFs和prelamin A，lamin A及progerin过表达的HEK293T细胞中Narf的表达量均无明显变化，而LMNA-/-MEFs中Narf的表达量明显降低。Narf过表达细胞中ROS和SOD表达无显著改变，而Narf千扰细胞中ROS显著上升，SOD的表达水平相应升高。　　 结论：Narf的C端386-456aa区域是与prelamin A结合的非必需区，N端1-78aa则是Narf核定位及与prelaminA相互作用所必须的。细胞中prelamin A堆积影响Narf的定位，使部分Narf蛋白分布于细胞质中。Prelamin A，lamin A及progerin堆积均不影响Narf蛋白水平，而laminA基因缺失Narf蛋白水平明显降低，表明prelaminA和laminA的缺失可能影响了Narf因的表达，或者是影响Narf蛋白的降解。Narf过表达不影响细胞的氧化应激，但Narf下调细胞中ROS和SOD水平明显升高，说明Narf下调影响了细胞的氧化应激能力。结果表明prelamin A堆积细胞的衰老与Narf系不明显，而prelamin A缺失导致的衰老和氧化应激水平上调可能部分通过Narf的途径来实现。