基于纳米金复合物的模拟酶催化性能及其应用研究

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纳米材料模拟酶是人工酶研究史上一新的里程碑,相比于天然酶,其催化效率虽略弱,但具有对外界环境的耐受能力较强(耐高温、耐酸)、造价低、保存时间长等优势。近年来,科学研究发现一些贵金属及其化合物的纳米材料具有酶的催化活性,其中纳米金及其复合物模拟酶的研究最为广泛,已成为人工酶研究的一个热点。本文主要以纳米金复合物为研究对象,构建了新的纳米材料复合物模拟酶体系,研究了其模拟酶的催化性能,并应用于实际样品中金属硫蛋白和葡萄糖的分析检测。第一章简述纳米材料模拟酶的研究现状及其检测应用,主要介绍了纳米模拟酶的定义及纳米金的制备方法,模拟酶在生物分子及重金属检测应用的研究进展,同时引出了本论文拟研究的目的和主要内容。第二章基于在pH4.5的醋酸钠缓冲溶液中,汞被柠檬酸钠(包裹在金纳米表面带负电荷)还原成Hg0和Hg+,吸附在金纳米表面,形成具有过氧化物酶活性的金-汞复合物,而MT通过巯基键和氨基键与纳米金和汞结合,形成具有更强过氧化物酶催化活性的AuNP-MT-Hg复合物,催化双氧水氧化ABTS生成ABTS+.的机制。建立了快捷、灵敏测定MT的光度法,检测限1.55nM。测定MT的回归方程为ΔA=9.42c(μM)-0.255,相关系数r=0.997。测定实际尿样MT含量的加标回收率为98.45%103.4%。第三章基于汞与金纳米形成金-汞复合物,结合在GO表面形成具有过氧化物酶活性的rGO-Hg-AuNPs复合物,活性较rGO-AuNPs模拟酶强的现象。使用紫外可见分光光度仪对rGO-Hg-AuNPs复合物模拟酶催化动力学进行研究并与HRP对比,发现该模拟酶的催化机制符合乒乓机制,对TMB亲和力较HRP强。同时应用XPS,FTIR,TEM等表征,分析Hg增强rGO-AuNPs复合物催化活性的机制。第四章基于rGO-Hg-Au NPs具有过氧化物模拟酶活性,能催化葡萄糖在GOD氧化作用下产生的过氧化氢分解生成活性氧,氧化TMB产生颜色变化的原理,建立一种可视化测定葡萄糖的新方法。反应体系中葡萄糖浓度为2.0×10–64.0×10–4mol/L时,吸光度变化值(ΔA)与葡萄糖浓度呈现较好的线性关系,线性回归方程为ΔA=7.95×10–3+2.50c(mM),相关系数为0.997,检出限为1.79μM。用于实际血糖的测定,加标回收率范围为99.7%104.2%。
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