葡萄糖氧化酶（GOD）在食品、医药及生物等领域有着广泛的应用。本试验以黑曲霉A9为出发菌株，研究了GOD基因在毕赤酵母GS115中的表达。本试验根据已发表的GOD基因序列设计一对引物，以黑曲霉A9基因组为模板，利用聚合酶链式反应（PCR）直接对GOD基因进行PCR扩增，再将PCR产物克隆入pMD18-T载体，经DNA测序，该基因为1743 bp，编码581个氨基酸。该基因序列已在GeneBank注册，登录号为DQ836361。将测序确认正确的GOD基因克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K中，获得酵母表达质粒pPIC9K／GOD，表达质粒pPIC9K／GOD经线性化后，采用电转化法转化毕赤酵母。通过调整参数，对影响电转化效率的主要因素进行探索，建立了质粒pPIC9K／GOD对毕赤酵母的高效电转化方法。通过MD和MM平板、PCR方法筛选和鉴定转化子。转化子发酵液经SDS-PAGE分析和GOD活力测定等方法鉴定，表明GOD基因在毕赤酵母中得到表达。摇瓶诱导168 h，酶活达到17.35 U／mL，蛋白含量达到659.56μg／mL。经SDS-PAGE测定，单亚基的分子量约为90，000 Da。硫酸-苯酚法测得其糖基化程度为33.4％。葡萄糖氧化酶底物专一性强，以葡萄糖为底物，采用双倒数作图法，测定其Km值为38.04 mmol／L，Vmax值为37.88μmol／min。酶学性质检测发现，重组酵母GOD的最适温度为38℃，比出发菌株提高了8℃。酶蛋白在20～50℃范围内热稳定性很好，温度超过60℃下降显著。酶蛋白在pH5.0～5.5范围内酶活基本不变，在pH6.0～8.0范围内也较稳定，酶活均保持在72％以上。Ag⁺、Hg²⁺、亚硫酸氢钠对酶蛋白有强烈的抑制作用，Cu²⁺、Fe²⁺、去氧胆酸钠表现稍微的抑制作用，而Ca²⁺、Fe³⁺、EDTA和SDS具有不同程度的激活作用。