杆状病毒AcMNPV体内、体外复制时基因组的变化

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  本研究以杆状病毒模式种苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(AcMNPV)的细菌人工染色体(AcBAC)为研究对象。AcBAC既能感染宿主,也可以象质粒一样在E.coli中复制,因此可简单、快速获得基因型均一的子代病毒。但AcBAC的多角体基因已被插入失活,为了使其具有口服感染性,本研究通过位点特异性重组,构建了能够产生多角体的重组病毒AcBACph作为本研究的实验材料。AcBACph在体外(Hi-5细胞和Sf-9细胞)、体内(四龄粉纹夜蛾幼虫)中进行连续传代时产生了多种子代病毒突变株。利用BAC-AcMNPV-E.coli研究平台和RFLP技术对体内、体外的第1,5,10代子代病毒进行REN分析:AcBACph在Hi-5细胞中和四龄粉纹夜蛾幼虫中连续传代后,所产生的子代病毒共有的基因组区域、基因组的平均大小、完整基因型所占比例都很相似;它们的第l代子代病毒包含较多病毒突变株,基因组序列完整的病毒株仅占6%(Hi-5)和2%(Tn幼虫),第5代的完整病毒株占52%(Hi-5)和87%(Tn幼虫),第10代的完整病毒株占82%(Hi-5)和83%(Tn幼虫)。AcBACph在Sf-9细胞中连续传代后,病毒基因组的变化模式却有所不同,第一代、第五代、第十代完整病毒株所占比例分别是:3%、2%、3%。无论在体外还是体内传代时,PstI-Dl、PstI-D2、PstI-N均存在于子代病毒基因组中。某些突变株具有超摩尔带,例如:PstI-D2、PstI-I,、PstI-J,并且这些超摩尔带均具有复制原点。应用TCID50技术检测了病毒感染细胞所产生的芽生型病毒的毒力,活体生测技术检测了病毒感染Tn幼虫产生的多角体的毒力,发现病毒群体中完整病毒的比例与病毒的毒力不呈正相关。
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