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目的： 制备99m Tc标记CD44mAb的分子探针，通过体外细胞实验及体内荷瘤鼠的生物分布和SPECT显像证明该探针示踪结肠癌干细胞的靶向性和可行性。 方法： 1.细胞培养及细胞CD44表达水平检测 体外分别用McCoys?5A和1640培养基培养HT29和DLD1人结肠癌细胞,通过流式细胞术（FCM）和Western blot检测两种细胞的CD44表达水平。 2.抗体的标记、纯化和稳定性检测 将双功能螯合剂SHNH分别与CD44mAb和IgG抗体连接后用99mTc标记，然后过PD10柱子纯化，形成99mTc-SHNH-CD44mAb和99mTc-SHNH-IgG分子探针，ITLC测定纯化前的标记率和纯化后的放射化学纯度（RCP）。分子探针与适量人新鲜血清混合，置于37℃条件下孵育，通过ITLC测定不同时间点分子探针的放射化学纯度来分析其稳定性。 3.体外细胞摄取实验 99mTc-SHNH-CD44mAb与HT29和DLD1细胞孵育，测定两种细胞在30、60、120和240min对探针摂取率的变化。阻断实验是提前在HT29细胞中加入过量未标记的CD44mAb后再加入99mTc-SHNH-CD44mAb。同型对照组是99mTc-SHNH-IgG与HT29细胞孵育。 4.荷瘤鼠的建立、SPECT显像及生物分布 HT29和DLD1人结肠癌皮下移植瘤模型的构建。37MBq(1mCi)99mTc-SHNH-CD44mAb和99mTc-SHNH-IgG尾静脉注射入荷瘤鼠后，在4、12、18、24h采集SPECT图像。阻断组提前1h注射过量未标记CD44m A b。与显像相对应的时间点处死并解剖荷瘤鼠，收集感兴趣器官，称重（g）并测量其放射性计数（CPM），计算每克组织的百分注射剂量率（%ID/g）。 5.组织CD44表达水平检测 显像结束后处死荷瘤鼠，取肿瘤组织，通过FCM、组织免疫荧光（IF）和Western blot分析其CD44表达水平。取肝脏、脾脏、肾脏和肌肉，进行组织IF，检测CD44表达水平。 结果： 1.细胞CD44表达水平检测 FCM分析HT29和DLD1细胞CD44表达率分别为47.5±0.7%和2.35±0.4%(n=3)。Western blot表明CD44在HT29细胞中是高表达的，在DLD1细胞中是低表达的。 2.抗体的标记、纯化、稳定性检测 99mTc-SHNH-CD44mAb和99mTc-SHNH-IgG标记率分别为80.84±0.42%和53.34±0.39%，放射化学纯度分别为98.73±0.18%和99.62±0.23%(n=3)，放射性比活度分别为12.2MBq/ug和7.9MBq/ug，在血清中孵育24h后的放射化学纯度分别为91.63±1.35%和93.73±0.88%(n=3)，具有较高的放射化学纯度和良好的稳定性。 3.体外细胞摄取实验 HT29细胞对99mTc-SHNH-CD44mAb的摄取随时间逐渐增加，240min时其摂取率为19.57±1.05%（n=3），明显高于DLD1细胞（240min摂取率4.32±0.29%，P＜0.05）。阻断组HT29细胞对99mTc-SHNH-CD44mAb的摄取明显减少(120min摂取率2.13±0.1%,P＜0.05)。两种细胞对99mTc-SHNH-IgG的摄取均很低。以上数据表明高表达CD44的HT29细胞可以特异性摄取99mTc-SHNH-CD44mAb。 4.荷瘤鼠SPECT显像和生物分布 SPECT显像表明HT29荷瘤鼠肿瘤部位随着时间延长显影逐渐清晰，12h开始显影，18h和24h明显显影。阻断组肿瘤部位几乎无显影。注射99mTc-SHNH-CD44mAb的DLD1荷瘤鼠和注射99mTc-SHNH-IgG的HT29荷瘤鼠，肿瘤部位显影不清晰，略高于本底。生物分布结果表明HT29移植瘤肿瘤部位对99mTc-SH NH-CD44mAb的摄取随着时间延长逐渐增加，24h时为15.32±1.27%ID/g（n=4），而阻断情况下，肿瘤部位摄取明显减低，24h时仅为8.1±0.93%ID/g；DLD1荷瘤鼠和注射99mTc-SHNH-IgG的HT29荷瘤鼠肿瘤部位对显像剂摄取均很低，24h时分别为5.63±1.36%ID/g和5.06±0.21%ID/g（n=4）。 5.组织CD44表达水平检测 HT29和DLD1移植瘤FCM表明CD44表达率分别为38.1±1.3%和5.31±0.5%（n=3）。Western blot也表明HT29肿瘤组织CD44表达高于DLD1肿瘤组织。组织免疫荧光显示HT29肿瘤组织荧光信号很强，有较高的CD44表达，而DLD1肿瘤组织荧光微弱，CD44表达很低。肝脏、脾脏、肾脏、肌肉组织未见明显荧光信号，几乎无CD44表达。 结论： 99mTc标记CD44mAb具有良好的放射化学纯度和稳定性。体外及体内实验表明99mTc-SHNH-CD44mAb与CD44+结肠癌干细胞的结合具有特异性和较高的亲和力，用于靶向结肠癌干细胞的示踪是可行且有效的，为靶向CSCs治疗及监测疗效提供临床应用的可能性。