党参多糖的分析及抗肿瘤活性研究

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党参(Codonopsispillosula)为桔梗科(Campanulaceae)多年生草本植物党参、素花党参、川党参及其同属多种植物的根,是我国传统的补益药,具有补中益气,健脾益肺之功效。党参含有多种有效成分,如多糖、酚类、甾醇类、皂苷、生物碱等。已有文献报道党参多糖具有增强免疫、抗肿瘤、抗氧化、降血脂等活性,但上述药理活性实验所用多糖多为粗品,结构性质并不明确。为进一步明确党参多糖的组成和性质,本文将党参多糖进行了全面系统地分级,首先用热水煮提、乙醇沉淀的方法得到党参水溶性总多糖,再用离子交换柱层析和凝胶过滤柱层析将总多糖逐步分级纯化,得到四种党参多糖级分。对分离纯化得到的四种党参多糖级分进行均一性鉴定及分子量、单糖组成的测定,研究结果如下:通过100℃热水煮提、80%乙醇沉淀和Sevage法脱蛋白得到党参水溶性多糖CPP(产率7.84%)。CPP总糖含量为89.1%,蛋白含量为0.6%。HPLC分析其单糖组成为鼠李糖(3.1%),半乳糖醛酸(38.8%),阿拉伯糖(16.6%),半乳糖(25.0%),葡萄糖(13.1%),甘露糖(2.9%)。采用DEAE-纤维素离子交换层析柱将CPP进行分级,分别用水、0.2MNaCl、0.3MNaCl溶液分步洗脱,得到中性糖级分CPP-1和酸性糖级分CPP-2、CPP-3。根据分子量分布情况,用SepharoseCL-6B凝胶过滤层析柱对CPP-2和CPP-3进一步分级得到CPP-2-1、CPP-2-2和CPP-3-1、CPP-3-2。应用SepharoseCL-6B凝胶过滤层析柱分析CPP-2-1、CPP-2-2、CPP-3-1和CPP-3-2分子量分布的情况,可知CPP-2-1、CPP-2-2、CPP-3-2分子量较均一,分子量分别为1.7×10~5Da、6.0×10~5Da和1.4×10~5Da。通过HPLC分析各级分单糖组成,CPP-2-1含有Rha(5.0%),GalA(53.5%),Ara(22.8%),Gal(17.8%);CPP-2-2含有Rha(2.7%),GalA(81.3%),Ara(7.0%),Gal(6.1%);CPP-3-1含有Rha(7.5%),GalA(25.3%),Ara(36.0%),Gal(31.2%);CPP-3-2含有Rha(9.9%),GalA(54.4%),Ara(21.7%),Gal(14.0%),因此推测四个级分都含有聚鼠李半乳糖醛酸结构域(RG)和聚阿拉伯半乳糖结构域(AG),但两种结构域的比例在各级分中不同,CPP-3-1中Ara(36.0%)和Gal(31.2%)含量最高,推测该级分含有大量AG结构域;CPP-2-2中GalA含量最高,达到81.3%,推测该级分含有大量的聚半乳糖醛酸结构域(HG)。根据上述结果初步判断CPP-2-1和CPP-3-2均是RG-I型果胶,CPP-2-2是HG型果胶,CPP-3-1是AG型果胶。人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL能特异性杀伤肿瘤细胞,对正常的细胞鲜有作用,是临床抗肿瘤的希望药物。但是肿瘤细胞对TRAIL的抗性限制了TRAIL在临床上的应用。寻找与TRAIL协同抗肿瘤的药物是目前研究的热点,具有重要理论意义和实际应用价值。因此我们研究了党参总多糖及其各级分单独或与TRAIL协同抗结肠癌作用。研究表明党参总多糖CPP单独作用时能显著抑制人结肠癌细胞HCT116的增殖,与TRAIL共同处理时具有显著的协同抑制HCT116细胞增殖的作用。而其他分离得到的党参多糖级分单独作用或与TRAIL共同作用时对HCT116细胞增殖的抑制作用不显著,说明在党参多糖各级分间可能存在协同作用。
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