与PLZF相互作用的细胞蛋白及HSV-1病毒蛋白的筛选与鉴定

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早幼粒细胞白血病锌指蛋白(promyelocytic leukemiazinc finger,PLZF)是含有BTB/POZ(bric a brac,tramtrack,broad complex-poxviruszinc finger)结构域的转录因子,首次由上海血研所报道,t(11;17)(q23; q21)染色体易位后PLZF与维甲酸受体α(retinoic acid receptorα,RARα)形成PLZF-RARα和RARα-PLZF融合基因造成急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)。野生型PLZF主要表达在发育中的中枢神经系统,出生前的肝、心、肾和细胞蛋白中。近期的文章报道,PLZF在NKT细胞中也表达,并且这个转录因子是这类细胞生长发育所必须的。PLZF是一个多功能的转录调控因子,在正常的发育和白血病的发生中起到重要作用,参与造血细胞生发的调控、骨骼发育,还可抑制细胞周期,诱导细胞凋亡,抑制一些基因的表达。近期报道表明,PLZF还参与Ⅰ型干扰素(TypeⅠ IFN)抗病毒作用,这揭示了PLZF在天然免疫方面也有重要的作用。Ⅰ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV-1)是一种在人群中高感染率的病毒,它主要导致口唇和眼部的黏膜皮肤以及大脑和新生儿内脏的感染,还可以导致生殖器感染。该病毒在人群中广泛地存在着潜伏感染。目前对于该病毒尚无疫苗或可以治愈该病毒的药物。此外由于HSV-1病毒基因组内有大量的非必需基因,因此可以插入大量的外源基因以及HSV-1嗜神经性感染等特性使得HSV-1成为良好的用于肿瘤治疗和基因治疗的载体。因此对该病毒的研究具有重要的科学意义和应用前景。随着新基因以及疾病相关基因的大量发现,揭示这些基因的功能及其在疾病基因治疗中的应用,日益成为医学和分子生物学研究的热点。   本研究利用酵母双杂交系统从人类白细胞cDNA文库中筛选出了7个与PLZF相互作用的候选宿主蛋白,荧光共定位实验显示PLZF与Nmi共定位,免疫共沉淀实验进一步揭示了PLZF与Nmi相互作用。同时我们首次利用酵母双杂交技术反向筛选出了与PLZF相互作用的HSV-1病毒蛋白,ICP0,ICP34.5等,荧光共定位实验表明PLZF与这二者都有共定位,免疫共沉淀实验进一步证明了PLZF与ICP0的相互作用。这些结果为进一步揭示PLZF的新功能,尤其是在抗病毒免疫方面的功能,以及PLZF在抗HSV-1病毒免疫中的作用机制及其生物学意义的研究奠定了基础。
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