【摘 要】
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目的：本实验设计引物分别克隆抗人CD2单抗OX34 Fd和轻链基因以及轻、重链可变区基因V_H和V_L，然后将OX34 Fd和轻链基因克隆入噬菌体展示载体pComb3；将轻、重链可变区基因V_L和V_
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目的：本实验设计引物分别克隆抗人CD2单抗OX34 Fd和轻链基因以及轻、重链可变区基因V_H和V_L，然后将OX34 Fd和轻链基因克隆入噬菌体展示载体pComb3；将轻、重链可变区基因V_L和V_H先后克隆入人-鼠嵌合Fab抗体的通用噬菌体展示载体pComb3C，得到OX34的Fab片段抗体展示载体pComb3／Fab-gⅢ和嵌合Fab片段抗体展示载体pComb3C／cFab-gⅢ，以噬菌体展示Fab抗体的形式对其特异性和亲和力进行验证。之后，切除载体gⅢ序列，构建成OX34—Fab和OX34—cFab的分泌性表达载体，在大肠杆菌中进行诱导表达、纯化，并进行初步的功能鉴定。 方法： 1、鼠抗人CD2抗体轻、重链基因片段的扩增 从杂交瘤细胞株中提取总RNA。设计引物，利用RT-PCR扩增抗体Fd和轻链基因以及轻、重链可变区基因V_H和V_L，得到目的片段。分别连入pMD18—T载体后，进行序列测定，并利用相应的软件对序列进行分析。 2、鼠抗人CD2 Fab片段抗体的制备 将轻链及Fd基因依次克隆到载体pComb3中，建成噬菌体表达载体pComb3／Fab-gⅢ。转化大肠杆菌XL1-blue，并利用辅助噬菌体M13K07进行挽救，得到噬菌体展示Fab抗
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