论文部分内容阅读
玉米是重要的粮食和饲料作物,同时也是重要的工业原料。随着玉米需求量的不断增加和对品质要求的不断提高,转基因玉米由于其特有的抗性,种植面积逐年扩大,其中抗除草剂玉米占据重要地位。因此,培育抗除草剂玉米新材料将在玉米育种中起到关键作用。本实验分别以H99和Hi-Ⅱ的幼胚为材料,优化由幼胚诱导胚性愈伤组织的条件,同时利用农杆菌介导法对H99幼胚、H99胚性愈伤组织和郑单958萌动胚三类受体系统进行遗传转化研究,得出以下结论：(1)利用玉米幼胚诱导愈伤组织时,幼胚的大小以1.5-2mmm最为适宜。本研究以H99和Hi-Ⅱ的幼胚诱导愈伤,其中H99诱导率较高,达到43.7%,Hi-Ⅱ的诱导率相对较低,只有8%。(2)H99在MS培养基中诱导率较高,而Hi-Ⅱ在N6培养基中诱导率较高。培养基中添加10mg/L的AgNO3对Hi-Ⅱ愈伤的诱导起促进作用,但抑制H99的诱导。培养基中添加2mg/L的2,4-D对两种幼胚形成愈伤均具有促进作用。由于高浓度的2,4-D具有毒害作用,因此,在继代培养时只需加入lmg/L。(3)以H99幼胚、H99胚性愈伤和郑单958成熟种子萌动胚为受体,进行遗传转化,结果表明：用H99幼胚为受体时,菌液OD600值为0.5、侵染时间为15min、幼胚大小为2mm时,转化效率最高；以H99愈伤组织为受体时,菌液OD600值为0.6、侵染时间为20min、乙酰丁香酮(AS)浓度为100umol/L时的转化效率最高。而以郑单958萌动胚为受体时,最适转化条件为菌液OD600值为0.8,侵染时间48h,AS浓度为100umol/L。(4)通过对转化植株进行PCR扩增检测、RT-PCR检测和bar基因金标免疫试纸条检测,证明bar基因已整合到玉米基因组中,并能够在T1代中遗传和表达。(5)比较三种受体的转化率,幼胚转化效率最高,可达7%,胚性愈伤组织为3%,而萌动胚最低,仅为2.1%。