猪链球菌(Streptococcus suis)是猪只上呼吸道常在的革兰氏阳性球菌,可引起猪败血症、脑膜炎和心内膜炎等多种疾病,通常存在于猪的鼻腔、扁桃体、生殖器和消化道等几个部位。在过去几十年内,猪链球菌感染一直是困扰全球养猪业的主要问题,给养殖业造成了巨大的经济损失,已被列为国家二类动物疫病。同时可通过伤口及呼吸道等途径感染人,引发人的化脓性关节炎、脑膜脑炎及心内膜炎等,严重的可致人死亡,使得猪链球菌感染成为严重的公共卫生问题。我国曾在四川、江苏等地爆发过人感染猪链球菌的疫情。猪链球菌广泛的存在,对人类和动物健康造成了极大的威胁。抗生素的使用与耐药病原菌密切相关,多重耐药菌的出现对公众健康构成严重威胁。国内外对猪链球菌耐药性的调查结果显示其耐药情况已经十分严重,其中optrA耐药基因可介导恶唑烷酮类和酰胺醇类药物耐药,而恶唑烷酮类代表性药物利奈唑胺(LZD)作为抗革兰氏阳性菌的“最后一道防线”,可用于治疗包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐万古霉素肠球菌(VRE)在内的革兰氏阳性菌感染。为了解猪链球菌在健康猪群中的血清型、耐药性以及optrA基因在猪链球菌中的流行情况。本研究首先对2018年11月至2020年1月采集于重庆市、贵州省部分养殖场、屠宰场的907份猪鼻拭子或者心肺组织样品进行了猪链球菌的分离鉴定。通过使用含有结晶紫(0.0002 g/L)、亚硫酸钠(0.1 g/L)、萘啶酮酸、多粘菌素B(均为0.15 g/L)及5%脱纤维绵羊血的哥伦比亚琼脂作为选择培养基,再扩增猪链球菌特异性基因gdh以确定猪链球菌。使用多重PCR方法诊断健康猪群中猪链球菌的流行血清型。根据美国临床实验室标准研究所(Clinical and Laboratory Standards Lnstitute,CLSI)所推荐的猪链球菌抗菌药物敏感性试验标准,采用K-B纸片扩散法进行15种药物的敏感性试验,以了解健康猪群中猪链球菌的耐药情况。使用质粒提取试剂盒提取细菌质粒,以PCR方法检测临床分离株中optrA基因的携带情况。对质粒进行测序后,对其序列进行生物信息学分析。结果从907份样本中共检测到58株猪链球菌,总分离率为6.4%。从地区来看,重庆市垫江县的猪链球菌分离率最高(11%),铜梁县的猪链球菌分离率最低(5.2%)。从时间上看第一季度猪链球菌分离率为3.48%,第二季度为7.4%,第三季度为7.22%,第四季度为6.6%,在不同季节猪链球菌的分离率有较为明显的差异,二、三季度分离率高于一四季度。不同来源的58株猪链球菌中有45株成功鉴定血清型,共覆盖6种血清型,其中最为常见的血清型为猪链球菌29型(25株,占总数的43.1%),其次为猪链球菌28型(7株,占总数的12%),猪链球菌21型(6株,占总数的10.3%)。对分离到的58株猪链球菌进行了8类一共15种药物的敏感性试验,结果显示对四环素、克林霉素、阿奇霉素和克拉霉素的耐药率都超过了80%,对红霉素的耐药率也超过了50%。另外,对酰胺醇类和喹诺酮类药物也有不同程度的耐药。所有临床分离株显示出的多重耐药情况从0-9种药物不等,且多重耐药率高达90%,出现25种耐药谱,其中最高耐9种药物的为1株重庆北碚分离株。研究提示青霉素类和头孢菌素类药物可作为重庆、贵州等地猪链球菌病治疗的首选药物。58株猪链球菌中仅有一株呈optrA阳性,流行率为1.7%(1/58),通过体外诱导将P69菌株氟苯尼考的MIC从4μg/mL诱导32μg/mL,但同时伴随生长速率的降低。通过测序质粒全基因组序列,使用IPRscan、BLAST软件,综合VFDB、Swiss-port、CAZy、GO和KEGG等数据库,注释蛋白质功能、毒力因子及耐药基因,并绘制完整的质粒圈图,结果显示P69为环状质粒,总长度为8 012bp。通过数据库对获得的ORFs进行功能注释,发现P69质粒包含optrA、erm(A)、erm(B)、erm(C)耐药基因,ABC转运蛋白及IS插入序列,以此探索质粒P69的功能及其生物学意义。