毛干DNA高效提取技术的研发及其效果评价

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毛发作为一种非损伤性的生物样本,在保护遗传学和分子生态学研究中发挥着十分重要的作用。毛干含有核DNA(nuDNA)和线粒体DNA(mtDNA),但质低、量少,已有的提取方法难以获得满足下游实验需要的DNA。这主要受限于角蛋白消化不彻底、小片段DNA回收效率低、色素去除不彻底以及大量残存细菌DNA。本文针对这些问题建立了一种高效的、适用范围广的及性价比高的毛干DNA提取方法。从北极狐(Vulpes lagopus)、华南虎(Panthera tigris amoyensis’)、狼(Canis lupus)、狗(Canis lupus familiaris)、梅花鹿(Cervus nippon)和牛(Bos taurus)等6种动物的毛干中提取DNA,采用荧光定量PCR方法对其nuDNA、mtDNA和细菌质粒DNA的含量进行定量检测,并用提取的DNA对微卫星(STR)和SNP标记进行分型实验,评估提取效果和所得到的DNA的可用性。主要结果如下:1.从毛干中提取的总DNA中mtDNA的拷贝数比nuDNA至少高出3个数量级。2.毛干中的nuDNA片段可满足150 bp以下的PCR扩增,最大扩增片段可以达到250 bp;mtDNA片段能满足1500 bp以上的PCR扩增。3.常规清洗毛发的方法无法彻底去除毛干上附着的细菌,细菌DNA是所提取总DNA的主要组份。通过65℃ 4 mol/L NaOH溶液处理毛干,在对nuDNA提取效率影响较小的情况下有效清除细菌DNA的污染。4.毛干DNA可以支持短片段的STR和SNP的分型,扩增片段越短,分型成功率和正确率越高,且SNP分型效果好于STR。
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