胃癌是世界最常见的恶性肿瘤之一,虽然近年来全球范围内胃癌的总体发病率呈下降趋势,但其绝对发病人数仍然很庞大,发病率和死亡率分别占居恶性肿瘤的第四位和第二位。在我国,胃癌发病率和死亡率居各类肿瘤前列。每年新诊胃癌患者人数达40万多,其中三分之二为进展期胃癌,且发病年龄具有明显的年轻化趋势。早期胃癌多无症状或仅有轻微症状,当临床症状明显时病情已属中晚期。胃癌的预后与分期分级密切相关。早期胃癌预后较好,术后5年存活率达90%以上；进展期胃癌的术后5年生存率只有10%-20%。然而只有7.5%的胃癌在早期被发现,所以胃癌的早期和及时诊断是提高其存活率的关键和重要前提条件。微小、RNA(microRNA, miRNA)是一类长约20～25个核苷酸的非编码RNA,它参与肿瘤细胞的生物调控过程,在肿瘤的发生、发展过程中间接发挥癌基因或者抑癌基因样作用。近来研究显示,组织和细胞中的miRNAs表达稳定,具有显著的肿瘤相关性、组织特异性和表达稳定性。寻找合适的miRNAs作为胃癌的生物标志物研究者们共同努力的方向。采用高通量的表达谱芯片技术,不少学者在胃癌组织中已筛选出了一些与胃癌相关的且对胃癌诊断具有一定价值的miRNAs。但肿瘤组织样本不易获取,组织miRNAs检测应用于临床诊断存在一定的局限和困难。而外周血样本的获得却十分方便,并且研究发现,miRNAs在外周血中同样具有肿瘤特异性和组织相关性并可长期稳定存在。国内外的研究报道也证明了血液中存在与胃癌相关的miRNAs。但目前已有的研究报道仅局限于单一的组织miRNAs或者循环miRNAs筛选,且miRNAs在组织和循环中的表达不尽一致,如果能将两者结合起来,找出胃癌组织和胃癌患者血浆中共同特异性差异表达的miRNAs作为胃癌诊断的生物学标志物,将具有更重要的临床意义。本研究选取了5例在年龄、性别、临床病理类型、分级分期与前期组织芯片中所选病例相匹配的胃癌病例血浆,同时选取5例年龄性别1：1匹配的正常对照血浆,采用TaqMan低密度芯片(TaqMan low density array, TLDA)检测并分析血浆的miRNAs表达谱,对照本课题组前期已完成的组织miRNAs表达谱芯片结果,筛选出组织和血浆中共同差异表达的miRNAs。采用real-time PCR方法对组织和血浆中共同差异表达明显的miRNAs进行两阶段病例对照验证,其中第一阶段样本包括50对胃癌组织及相应的癌旁正常组织、80例胃癌病例血浆、80例年龄性别与病例1：1匹配的正常对照血浆；第二阶段样本包括200例胃癌病例血浆和200例年龄性别与病例1：1匹配的正常对照血浆。采用SPSS16.0绘制受试者工作特征曲线(receive operating charactreristic curve, ROC)并计算曲线下面积(area under the ROC curve, AUC),评价单个miRNA以及不同miRNAs组合对胃癌的诊断价值。同时检测不同miRNAs在四种胃癌细胞(BGC823、 MGC803、SGC790、MKN28)及其相应细胞培养液中的miRNAs表达量,以检测其在胃癌细胞和细胞培养液中表达的一致性。TLDA分析在血浆中共筛出142个差异表达的miRNAs,其中表达上调的有65个,表达下调的有77个。将血浆miRNAs表达谱芯片结果与前期胃癌组织miRNAs表达谱芯片结果对比分析,共筛选出组织和血浆中表达趋势一致的13个miRNAs,其中表达下调的有8个,表达上调的有5个。以血浆表达谱中△ACt大于等于2为标准,共筛选出4个差异明显的miRNAs,分别为miR-148a、 miR-142-3p、miR-26a和miR-195,这四个miRNAs在胃癌组织和胃癌病例血浆中表达均下调。一阶段验证中,这四个miRNAs在大样本胃癌组织和胃癌病例血浆中表达仍明显下调,差异具有统计学意义。在更大血浆样本的二阶段验证中,四个miRNAs表达差异仍具有显著统计学意义。ROC分析显示：四种miRNAs在单个或者不同组合情况下对胃癌均有一定的诊断价值,其中miR-26a对胃癌诊断起主导作用,miR-26a单独即对胃癌具有较高的诊断价值,AUC达0.882,灵敏度为83.6%,特异度为81.5%。进一步研究发现,miR-26a在不同分级分期胃癌患者血浆中表达几乎没有变化,不同分级分期胃癌患者血浆中的miR-26a表达量均显著低于正常对照血浆。不同胃癌细胞验证发现,miR-26a在细胞培养液中的表达量随着肿瘤细胞中表达量的改变而改变,且变化趋势基本一致。miR-26a在胃癌患者血浆中表达显著稳定下调,血浆miR-26a可较好地区分胃癌患者和正常人群,灵敏度和特异度均较高,可作为潜在的胃癌早期诊断的有效循环miRNAs生物标志物。