杜氏盐藻电转化体系的建立与外源VgDGAT1a基因的遗传转化

来源 :山西农业大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:zhaisuorenjlu
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杜氏盐藻(Dunaliella salina)是单细胞真核绿藻,富含类胡萝卜素。培育富油杜氏盐藻是拓展其利用盐碱地及其水体资源生产优质生物燃油的关键。为此,本文以杜氏盐藻为试材,以来自高油植物斑鸠菊(Vernonia galamensis)编码高DGAT酶活性的VgDGAT1a基因为靶基因,通过遗传转化以期培育优异的高油杜氏盐藻株系。主要研究结果如下:(1)建立了盐藻纯化体系。对头孢霉素、氯霉素、链霉素和氨苄青霉素去除盐藻培养杂菌污染效果的测试表明,各抗生素除菌作用可累加,且4种抗生素两两组合的除菌效果更好。(2)杜氏盐藻对抗生素的耐受性实验表明,盐藻对氯霉素的耐受性差。在培养5天时,加入氯霉素的盐藻藻液颜色发黄,细胞分解,内容物流出。与对照组相比,高浓度的头孢霉素、链霉素和氨苄青霉素(1000μg/m L)对盐藻细胞的生长未产生影响。(3)建立了盐藻的电转化优化体系。当质粒为6μg/m L时,在0.4KV、4ms电击条件下,对培养7天的盐藻进行电转化,转化效率最高可达2.1‰,明显高于盐藻常规电转化方法转化效率。(4)尼罗红染色结果表明,与野生型盐藻相比,转基因盐藻细胞内油脂体的大小和数目发生了显著的变化,油脂体数目增多,油脂体的体积变大。(5)利用重量法测定盐藻细胞内总脂的含量,结果表明转基因盐藻细胞内的总脂占干重的百分比为37%,与野生型相比提高了21.7%。(6)利用凯式定氮仪和丙酮法对野生型和转基因盐藻分别测定蛋白和类胡萝卜素含量,结果表明转VgDGAT1a基因对盐藻细胞中蛋白和类胡萝卜素的积累没有产生显著影响。
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