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羊传染性脓疱病毒（Orf virus,ORFV）是线性双链DNA病毒,属于痘病毒科、副痘病毒属成员,主要感染山羊、绵羊及人的一种高度接触性传染病,又称羊传染性脓疱病（Contagious Ecthyma,CE）或“羊口疮（Orf）”。ORFV具有嗜上皮性,能引起患病动物产生红斑、丘疹、水泡以及脓疱的临床症状。ORFV主要感染羔羊,受感染羔羊常会因为口角疼痛继而发生采食障碍,导致减重。该病原能够持续感染羊群,很难清除,单纯感染Orf,死亡率较低,临床症状不明显,很容易被忽视。然而,临床上羔羊容易发生继发感染而导致死亡率升高,给养羊业带来巨大的危害。目前,该病已被世界动物卫生组织列为法定报告传染病。至今为止,针对于羊传染性脓疱病,尚无有效的治疗药物,目前临床上主要依靠接种疫苗来防控此病。但市场上的传统的灭活疫苗和弱毒疫苗存在着免疫保护持续时间短、毒力返强、散毒等安全隐患,导致在临床应用上受到限制,无法满足当前形势下针对该病的防控需求。因此急需研发出一种新型疫苗来防治该病。ORFV的002基因和121基因位于基因组两端变异区,且002基因及121基因所编码的蛋白具有抑制核转录因子κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）的能力;推测ORFV的002及121基因的功能可能与病毒毒力相关。本研究以实验室保存的ORFV毒株“ORFV-SY17”为原始毒株。在获得ORFV002单基因缺失株（ORFV-SY17△002）的基础上,利用同源重组技术制备ORFV002/121双基因缺失疫苗减毒株。首先构建出转移载体pSPV-121LEGFP-121R。通过细胞转染实验,将转移载体转染进已接种ORFV-SY17△002的OFTu细胞,经过筛选,得到002基因及121基因缺失的重组病毒株ORFV-SY17△002/△121。ORFV-SY17△002/△121遗传性状稳定、TCID50为10-5.625/0.1ml。002和121基因的缺失并不影响毒株在细胞中的复制能力。选取15头3月龄左右羔羊,羔羊应未注射过任何疫苗,随机分为三组,分别为ORFV-SY17△002/△121免疫组（M-002/121）、ORFV-SY17免疫组（M-SY17）和PBS对照组。所有组别羔羊经唇部划痕的方式进行病毒接种,M-002/121和M-SY17组接种相应病毒,对照组接种无菌PBS。在接种后的第3周进行加强免疫。分别于免疫后1d、3d、5d、7d、14d、21d、28d、35d、42d采集各免疫组羔羊血液,分别进行抗凝血处理和分离血清处理,抗凝血处理后分离出T淋巴细胞进行流式检测（FACS）CD4+、CD8+T淋巴细胞表达情况;分离血清后使用ELISA检测试剂盒,进行IL-4及IFN-γ细胞因子水平的检测。结果显示,ORFV-SY17及ORFV-SY17△002/△121都能够诱导机体产生细胞免疫和体液免疫,但体液免疫水平不高,以细胞免疫应答为主。在一免后的第5周,从各实验组中随机各抽取3头羔羊,进行攻毒实验,攻毒所用毒株为ORFV-SY17野毒株。PBS对照组全部发生感染而实验组未出现感染。上述结果表明,ORFV-SY17野毒株及ORFV-SY17△002/△121双基因缺失减毒株在本试验中的免疫保护率达100%。且ORFV-SY17△002/△121双基因缺失减毒株相比于ORFV-SY17野毒株来说,接种时对羔羊产生的采食障碍等影响更小,更适宜作为疫苗株。这对羊传染性脓疱病的防控有重要意义。