论文部分内容阅读
本试验以克氏原螯虾(Procambarus clarkii)为研究对象,探究饲料中不同糖脂比(CHO:LIP)对克氏原螯虾生长性能,糖脂代谢,及先天性免疫的影响,确定克氏原螯虾对饲料中适宜糖脂比的需求。研究结果丰富了甲壳动物营养代谢基础研究成果体系,为开发克氏原螯虾高能低蛋白饲料,水产饲料蛋白节约作用提供了科学依据。本研究主要包含以下三个部分:1、饲料中不同糖脂比对克氏原螯虾生长性能、抗氧化能力及肌肉常规营养成分的影响以鱼粉、豆粕和菜粕为蛋白源,以豆油为脂肪源,以玉米淀粉为糖源,配制4种等氮等能的试验饲料。挑选420尾克氏原螯虾(初重9.10±0.15g)随机分为4组,每组3个重复,每个重复35尾虾。分别投喂4种试验饲料,试验周期为8周。结果表明:(1)糖脂比5.94组克氏原螯虾有最高的生长性能和最低的饲料系数,与糖脂比1.88、3.25及13.60组相比存在显著差异(P<0.05)。饲料糖脂比对克氏原螯虾存活率和肝体指数无显著影响(P>0.05)。(2)克氏原螯虾血淋巴和肝胰腺中的总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)及超氧化物歧化酶(SOD)活性在糖脂比5.94组有最大值,显著高于糖脂比1.88、3.25及13.60组(P<0.05),血淋巴和肝胰腺中丙二醛含量呈现出相反的趋势,在糖脂比5.94组有最小值(P<0.05)。(3)克氏原螯虾腹部肌肉粗脂肪含量在糖脂比13.60组有最小值,显著低于糖脂比1.88、3.25及5.94组(P<0.05)。糖脂比5.94组克氏原螯虾腹部肌肉粗蛋白含量有最大值,显著高于糖脂比1.88及3.25组(P<0.05)。饲料糖脂比对克氏原螯虾腹部肌肉粗灰分及水分的含量无显著影响(P>0.05)。试验结果表明,饲料中适宜糖脂比(5.94)能增强克氏原螯虾的抗氧化能力,更有利于克氏原螯虾的生长。2、饲料中不同糖脂比对克氏原螯虾消化吸收能力、血淋巴生化指标及糖脂代谢的影响试验设计和饲养方案同试验1。结果表明:(1)克氏原螯虾肠道淀粉酶及蛋白酶活性在糖脂比5.94组有最大值,显著高于糖脂比1.88、3.25及13.60组(P<0.05)。肠道脂肪酶活性随饲料糖脂比从1.88升高到13.60而显著下降(P<0.05)。(2)糖脂比13.60组克氏原螯虾血淋巴胆固醇水平最低,显著低于其他各组(P<0.05),然而血淋巴葡萄糖水平呈现相反趋势(P<0.05)。饲料糖脂比对克氏原螯虾血淋巴甘油三酯水平无显著影响(P>0.05)。(3)克氏原螯虾肝胰腺磷酸果糖激酶(PFK)的活性,pfk基因,丙酮酸激酶(pk),乳酸脱氢酶(ldh),脂肪酸合酶(fas),胆固醇调节元件结合蛋白1(srebp1),视黄酸X受体(rxr)和己糖激酶(hk)基因的m RNA表达水平在糖脂比13.60组有最大值,显著高于糖脂比1.88、3.25及5.94组(P<0.05),然而脂蛋白脂肪酶(LPL)、肝酯酶(HL)和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)的活性,酰基辅酶a氧化酶(aco)、脂肪酸结合蛋白基因(fabp)、酰基辅酶A合成酶(acsbg)、葡萄糖6-磷酸酶(g6pase)、pepck和果糖-1、6-二磷酸酶(fbpase)基因的m RNA表达水平在糖脂比13.60组有最小值,显著低于糖脂比1.88、3.25及5.94组(P<0.05)。研究结果表明,饲料中适宜的糖脂比(5.94)能促进克氏原螯虾对营养物质的吸收利用。与此同时,克氏原螯虾可以通过调节自身的物质代谢进程(糖异生、糖酵解、脂类生成及脂类降解)来应对饲料中碳水化合物和脂质水平的变化。3、饲料中不同糖脂比对克氏原螯虾器官组织形态、先天性免疫及TLR-MAPK/NF-κB信号通路的影响试验设计和饲养方案同试验1。结果表明:(1)糖脂比3.25和5.94组克氏原螯虾肝胰腺和肠道有最佳的组织形态,肝胰腺上皮细胞排列紧致,空泡较小,大小一致,并有更多更大的B细胞存在。肠道切片可以观察到正常的细胞核和排列有序、形态正常的上皮细胞,无明显空泡。(2)克氏原螯虾血淋巴中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)活性及白蛋白(ALB)含量在糖脂比5.94组有最小值,显著低于糖脂比1.88、3.25及13.60组(P<0.05)。然而血淋巴溶菌酶(LZM)活性,总蛋白(TP)及球蛋白(GLB)含量呈现相反的趋势,在糖脂比5.94组有最大值,显著高于糖脂比1.88、3.25及13.60组(P<0.05)。(3)肝胰腺中TLR-MAPK/NF-κB信号通路相关基因的表达水平(tlr3、myd88和mapk3)在糖脂比5.94组有最小值,显著低于糖脂比1.88、3.25及13.60组(P<0.05)。糖脂比5.94组肝胰腺nf-kbα、nf-kbβ、nf-kb p105和traf6基因的表达水平显著高于糖脂比1.88、3.25及13.60组(P<0.05)。各组间mapk7和p38 mapk基因的表达水平差异并未达到显著水平(P>0.05)。(4)免疫相关基因包括hsp70、gpx、cat、mnsod、cuznsod、gst及cypa的表达量在糖脂比5.94组有最大值,显著高于糖脂比1.88、3.25及13.60组(P<0.05)。饲料糖脂比对crustin基因的表达水平无显著影响(P>0.05)。研究结果表明,适宜糖脂比(5.94)条件下,克氏原螯虾有较强的先天性免疫能力。不适宜的糖脂比(1.88、3.25及13.60)会抑制克氏原螯虾的先天性免疫能力,造成组织损伤并激活炎症相关信号通路。根据以上的研究结果可知,适宜的饲料糖脂(5.94)比在促进克氏原螯虾生长,增强抗氧化能力及先天性免疫力,抑制炎症相关信号通路基因的表达来维持克氏原螯虾肠道及肝胰腺健康状况方面起着重要作用。综上所述,饲料糖脂比为5.94(约36.23%碳水化合物及6.10%脂质)对克氏原螯虾的生理状况和健康状况是最适宜的。