莪术油中促进血管生存活性物质的筛选、作用机制及安全性研究

来源 :温州医学院 温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:aijieyeyi559
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目的:筛选莪术油中促进血管生成的活性物质,追踪有效物质至单体成分,初步研究其作用机制,并研究莪术油中各分离物质的安全性,为临床用药提供初步的依据。   方法:采用斑马鱼生物模式,以斑马鱼体节间血管生成数量和形态为指标,应用现代分离技术,对莪术油中促进血管生成的有效成分进行追踪分离;并用仔鱼切尾实验、成鱼剪尾实验进行活性验证;运用现代谱学技术对有效成分进行结构鉴定。采用噻唑蓝(MTT)比色法测血管内皮细胞增殖、ELISA法测定细胞中血管内皮生长因子(VEGF)含量;相对荧光定量PCR法检测仔鱼切尾后体内血管内皮生长因子VEGFA及受体VEGFR2基因的表达。观察记录莪术油中不同分离物质对斑马鱼胚胎发育畸形、孵化率、心率、自主运动次数、孵化后仔鱼泳速以及仔鱼体重的影响。   结果:   1、筛选出莪术油中分离得到的组份6具促进血管生成活性,并追踪至单体成分,经结构鉴定为莪术醇。莪术醇对血管内皮细胞的增殖、血清中VEGF的含量均无显著影响(P>0.05);莪术醇使仔鱼切尾后再生加快(P<0.01),能升高仔鱼体内与血管生成主要相关的VEGFA及VEGFR2基因的表达量(P<0.05),但高浓度时切尾后的仔鱼发生色素沉着、游囊关闭,EC50值为20.98mg·L-1,影响仔鱼尾部再生;在莪术醇的作用下,斑马鱼成鱼剪尾后血管再生密度大,且子代胚胎正常孵化、无畸形。   2、莪术油的各分离物质中,组份1、组份2、组份3、组份4、组份5、组份6、组份7、化合物6-1、莪术醇对斑马鱼胚胎孵育120h时(120hpf)的LD50值分别为553.05mg·L-1、38.21mg·L-1、596.83mg·L-1、67.17mg·L-1、95.40mg·L-1、26.83mg·L-1、59.10mg·L-1、78.23mg·L-1、42.47mg·L-1,其中组份2、组份6、组份7可引起心包囊肿,EC50(96hpf)值分别为43.62mg·L-1、24.86mg·L-1、30.51mg·L-1;组份5、化合物6-1、莪术醇可引起身体弯曲,EC50(96hpf)值分别为30.05mg·L-1、117.45mg·L-1、51.68mg·L-1;组份1、组份2、组份3、组份4、组份5、组份6、组份7、莪术醇对斑马鱼胚胎的孵化率有抑制效应。低浓度莪术醇使斑马鱼自主运动次数增多(P<0.01),但随着试药浓度升高抑制自主运动。斑马鱼胚胎孵育36h到72h,莪术醇使心率下降,且52h时各浓度组均有极显著影响(P<0.01)。斑马鱼胚胎孵育至120h时,在正常光照和光刺激下,莪术醇使斑马鱼仔鱼泳速减小(P<0.05);仔鱼的体重减轻(P<0.05)。   结论:莪术醇是莪术油中具促进血管生成作用的主要活性成分,能促进斑马鱼的血管生成,可提高仔鱼切尾后鱼体内VEGFA及VEGFR2基因的表达量,促进尾部再生,但高浓度的莪术醇具一定毒性。莪术油中分离得到的大多数成分可影响斑马鱼胚胎的正常发育。
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