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第一部分Notch信号通路相关配体Jaggedl在儿童急性白血病中的表达特点及意义目的：探讨Notch信号通路相关配体Jaggedl在急性白血病中的表达特点及临床意义。方法：收集88例初诊儿童急性白血病骨髓液(包括AML25例,B-ALL52例,T-ALL11例),18例ITP患儿骨髓液为对照组。应用Real-Time PCR法检测各组骨髓单个核细胞中Jagged1 mRNA表达水平。结果：1)Jaggedl在AML组、B-ALL组、T-ALL组及对照组均有表达；2)AML组Jaggedl表达水平高于对照组,差异无统计学意义(P>0.05,n=25)；3)B-ALL组Jaggedl表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,n=52)；4)T-ALL组Jaggedl表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,n=11)；5)在B-ALL组中,高危组Jaggedl表达水平高于在标危组与中危组,差异有统计学意义(P<0.05)；结论：Notch相关配体Jaggedl在不同类型儿童急性白血病中的表达水平不一致,与对照组相比,B-ALL中呈高表达,T-ALL呈低表达,AML中呈正常表达,提示在ALL中存在Jaggedl的表达异常。第二部分B-ALL细胞影响骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化及其机制研究目的：研究B-ALL细胞对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)成骨分化的影响,并探讨Notch信号通路在此过程中的作用。方法：采用B-ALL细胞与BMSCs体外共培养模型模拟体内微环境,以BMSCs单独培养及正常骨髓单个核细胞与BMSCs共培养作为对照。成骨诱导条件下共培养3天后,Real time PCR及Western-blot方法检测各组成骨分化标志物OPN、OCN、Runx2 mRNA和蛋白表达差异；成骨诱导条件下共培养14天后,茜素红S染色检测BMSCs的矿化能力,碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, ALP)试剂盒检测ALP活性。最后通过重组蛋白Jagged1与中和抗体anti-Jagged1-Ab激活与抑制BMSCs中Notch信号通路,探讨B-ALL细胞是否通过Jaggedl激活BMSCs中Notch信号通路影响BMSCs向成骨细胞分化。结果：1)B-ALL细胞与BMSCs共培养组中,成骨分化标志OPN、 OCN表达水平较对照组降低,同时ALP活性及矿化能力较对照组减低；2)B-ALL细胞与BMSCs共培养后,BMSCs中Notch信号通路下游基因Hes1表达水平较对照组上调,提示BMSCs中的Notch细胞通路被激活；3)B-ALL细胞与BMSCs共培养体系中加入anti-Jagged1-Ab中和抗体后,Notch信号通路被抑制,同时成骨分化标志OPN、OCN表达上调；4)BMSCs中加入重组蛋白Jaggedl能够激活Notch信号通路,同时成骨分化标志OPN、OCN表达下降；5)BMSCs中Notch信号通路被抑制后,其下游基因Hesl表达下调,而成骨分化特异转录因子Runx2蛋白表达上调；结论：B-ALL细胞可抑制BMSCs向成骨细胞分化,其可能的机制是B-ALL细胞通过Jagged1激活BMSCs中的Notch信号通路,其下游基因Hes1活化降低成骨分化转录因子Runx2蛋白表达水平,从而抑制BMSCs向成骨细胞分化。第三部分B-ALL细胞影响骨髓间充质干细胞向内皮细胞分化及其机制研究目的：研究B-ALL对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)内皮分化的影响,并探讨在此过程中可能存在的机制。方法：采用B-ALL细胞与BMSCs体外共培养模型模拟体内微环境,以BMSCs单独培养及正常骨髓单个核细胞与BMSCs共培养作为对照。共培养三天与七天后,Real time PCR检测各组内皮分化标志物Flk-1、CD31、vWFmRNA表达差异；Western-blot方法检测各组内皮分化特异标志CD31、Flk-1蛋白表达差异；再通过共培养中加入中和抗体anti-Jagged1-Ab抑制BMSCs中Notch信号通路,验证B-ALL细胞是否通过Jaggedl激活BMSCs中Notch信号通路影响BMSCs向内皮细胞分化。最后采用ELISA检测各组培养上清中VEGF分泌蛋白表达水平,探讨B-ALL细胞影响BMSCs向内皮分化的机制。结果：1)B-ALL细胞与BMSCs共培养三天后,BMSCs内皮分化标志Flk-1、CD31、vWF mRNA表达水平及Flk-1、CD31蛋白表达水平较对照组升高,但无显著差异(P>0.05)；2) B-ALL细胞与BMSCs共培养七天后,BMSCs内皮分化标志Flk-1、CD31、vWF mRNA表达水平及Flk-1、CD31蛋白表达水平较对照组升高,有显著差异(P<0.05); 3) B-ALL细胞与BMSCs共培养后,Notch信号通路被激活；4)共培养组中加入anti-Jagged1-Ab中和抗体后,Notch信号通路被抑制,但Flk-1、CD31、vWF mRNA表达水平及Flk-1、CD31蛋白表达水平无明显改变；5)采用ELISA检测共培养组中VEGF分泌蛋白表达水平,发现共培养组中VEGF表达水平上调,同时B-ALL细胞与BMSCs中VEGF表达水平相应的升高,推测BMSCs内皮分化机制可能与共培养环境中VEGF分泌蛋白水平升高相关。结论：B-ALL细胞可促进BMSCs向内皮细胞分化,其可能的机制是与B-ALL细胞与BMSCs共培养后促进共培养环境中VEGF分泌蛋白水平升高有关,而Notch信号通路在此过程并不起主要作用。