论文部分内容阅读
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起的病毒性传染病,PRRSV与猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages, PAMs)之间的相互作用与疾病的发生密切相关。为了解PRRSV对仔猪固有免疫应答和适应性免疫应答的动态影响,检测了PRRSV感染后PAMs免疫相关因子基因转录及其表达的动态变化。选取5头PCV2和PRRSV血清抗体和抗原均为阴性的35日龄断奶仔猪,前腔动脉放血致死,无菌取出肺脏,灌洗出PAMs进行体外培养,分为实验组和对照组,实验组接种PRRSV(GXBB株),对照组加等量1640细胞培养液,并分别于0h、12h、24h收取细胞,提取细胞总RNA并反转为cDNA,用定量RT-PCR方法检测了PRRSV感染PAMs后免疫相关因子基因表达的动态变化。结果显示,IL-2先上升后降低,24h时显著低于对照组；IL-6mRNA水平接种PRRSV后逐渐升高,24h明显高于同时间对照组；PRRSV可使PAMs表达IL-8逐渐降低,12h和24h均显著低于对照组；PRRSV可逐渐上调体外培养PAMs IL-10的表达,24h时显著高于同时间对照组；PAMs中TNF-α mRNA的表达在PRRSV的作用下逐渐上调,12h和24h均显著高于对照组,说明PRRSV在引起一过性免疫增强后,可造成明显的免疫抑制。为进一步了解PRRSV对PAMs分泌细胞因子的动态影响,选取5头PCV2和PRRSV血清抗体均为阴性的35日龄的断奶仔猪,前腔动脉放血致死后,取出肺脏,无菌罐洗出肺泡巨噬细胞进行体外培养,分为实验组和对照组,实验组接种PRRSV(GXBB株),对照组加等量1640细胞培养液,并分别于Oh、12h、24h收取细胞培养上清液,用ELISA法检测IL-6、IL-10、TNF-a含量的动态变化,分析PRRSV对PAMs免疫功能的影响。结果显示,PRRSV作用后12h和24h,PAMs培养上清液中IL-6和TNF-α含量均显著高于对照组(p<0.05); PRRSV作用12h时攻毒组IL-10的含量较对照组高,而24h攻毒组IL-10的含量较对照组低,TNF-a在12h时显著高于对照组(p<0.05),24h虽仍高于对照组,但差异不显著(p>0.05)。由此可见,PRRSV在感染24h内,在激活体外培养PAMs免疫反应的同时可引起明显的免疫调节紊乱。