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本论文研究了剑麻组织和细胞培养中培养基类型、培养条件、培养基组成中不同碳源、氮源和激素对愈伤组织细胞生长和蛋白酶活力的影响:采用Co60—γ射线进行辐射诱变;并对剑麻愈伤组织细胞悬浮培养进行了初步研究,取得了下述主要研究结果。 1.剑麻愈伤组织的诱导与培养 在MS、LS、N6、B5四种培养基中,N6培养基诱导剑麻愈伤组织启动最快;LS、MS培养基剑麻愈伤组织诱导率高、继代培养生长效果好;B5培养基不适于在剑麻组织和细胞培养中采用。(25±2)℃培养温度下剑麻愈伤组织生长快,长势旺。12h弱光照和12h强光照条件下的剑麻愈伤组织启动快,生长好,24h光照和黑暗处理不利于剑麻愈伤组织的诱导和生长。 2.剑麻愈伤组织诱导产蛋白酶 通过MS、LS、N6、B5四种培养基进行剑麻愈伤组织诱导产蛋白酶研究,无论进行固体静态培养,还是液体悬浮培养,四种培养基上生长的愈伤组织均能产生一定量的蛋白酶,但以MS和LS培养基上培养的剑麻愈伤组织产酶活力高,其中有两个细胞株的蛋白酶活力比外植体蛋白酶活力分别高9.38%和12.51%。各培养基上诱导产生的剑麻蛋白酶有20.01~57.23%分泌到培养基中。在(32±2)℃、(25±2)℃和(18±2)℃三种培养温度下,剑麻蛋白酶的活力随培养温度的降低而升高;在12h弱光和12h强光的条件下,剑麻蛋白酶活力以12h弱光培养的为高。 蔗糖、葡萄糖、麦芽糖和可溶性淀粉四种碳源,各1%、2%、3%和4%四种浓度培养中,以蔗糖或葡萄糖培养有利于剑麻愈伤组织细胞生长和蛋白酶活力提高。其中1~2%浓度培养有利于愈伤组织细胞快速生长,3~4%浓度培养有利于剑麻蛋白酶活力提高。在4%的蔗糖培养条件下筛选出一株蛋白酶活力比外植体高34.38%的细胞株。 剑麻愈伤组织在NO3-浓度为39.41mmol/L、NH4+浓度为20.62mmol/L的无机态氮培养下,细胞生长速率增长最快;在此无机态氮基础上,分别添加1~2%的水解乳蛋白或酪蛋白,剑麻蛋白酶活力迅速提高,尤其是以蛋白酶