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免疫活性肽(Immunopeptide)不仅在体外培养情况下刺激机体淋巴细胞的增殖、增强巨嗜细胞的吞噬能力，还能在生物体内起重要的免疫调节作用，增强机体的免疫力，提高对外界病原物质感染的抵抗能力。本论文根据糜蛋白酶专一酶切位点，对Val-Glu-Pro-Ile-Pro-Tyr、Gly-Leu-Phe等8个免疫活性小肽进行拼接，设计出具有刺激免疫活性的杂合肽；并分别在其C-末端和N-末端添加起始密码子ATG和酿酒酵母强终止密码子TAA，以保证小肽蛋白的正确表达。为便于免疫活性肽表达后的分离和检测，在小肽序列的N-末端添加了6个His的标签。然后，根据酿酒酵母(S.cerevisiae)偏爱密码子，设计出对应的DNA序列。设计得到的DNA序列含有表达为蛋白质所需的所有要素，命名为免疫活性小肽基因IMP。IMP基因分两部分进行DNA序列合成，并通过PCR扩增、EcoRⅠ酶切和连接，获得了IMP基因全序列。通过BglⅡ酶切位点将IMP基因克隆至穿梭质粒载体pMA91，获得重组载体pMA91-IMP，转化大肠杆菌JM109，经PCR检测、酶切鉴定及测序，确认所得到的IMP基因与我们设计的基因序列完全一致，且基因插入载体的方向正确。将重组表达载体pMA91-IMP经LiAc／ssDNA／PEG法转化入酿酒酵母宿主菌H158中。通过亮氨酸营养缺陷型YNB培养基筛选出转化子，并通过菌落PCR进行进一步的筛选和鉴定。根据设计在小肽序列N-末端的His-tag，应用Ni-NTA His·Bind树脂对表达的免疫活性肽进行富集，进而进行SDS-PAGE电泳检测。结果表明免疫小肽基因IMP在酵母中得到表达。采用不同的培养时间、初始pH值、葡萄糖浓度、温度，通过摇瓶培养进行转基因酵母表达条件优化。在摇瓶优化发酵条件的基础上，用10 L发酵罐进行扩大培养。转基因酵母发酵后经离心浓缩，分两个阶段投喂大菱鲆(Scophthatmus maximus L.)幼苗，检测免疫活性肽对鱼苗抗病力、成活率和生长的影响情况。第一阶段为鱼苗孵出后6到20天左右，这一阶段是喂养管理的关键时期，仔鱼由内源性营养向外源性营养转化，死亡率较高，也是大菱鲆苗种培育过程中损失最严重的一个时期；先用转基因酵母H158(pMA91-IMP)强化投喂轮虫，再用强化后的轮虫投喂鱼苗。第二阶段为鱼苗孵出20天，可摄食颗粒饲料后，把转基因酵母H158(pMA91-IMP)直接作为饲料添加剂进行投喂。经过两个多月的分组投喂实验，发现实验组鱼苗的成活率与体长比对照组明显增加，其中“实验组”的死亡率约为58％，“对照1组”和“对照2组”分别为68％和70％；“实验组”平均体长比“对照组”长约7.0 mm；“实验组”体形发育正常，很少出现白化病等发病现象，2个对照组在实验后期出现一些白化病情，并导致鱼苗部分死亡。证明免疫增强型酵母可显著提高育苗的成活率，对白化病等有很好的免疫增强作用。