真菌毒素是由丝状真菌所产生的具有强烈毒性的一类次级代谢产物,通常还具有致癌、致畸、致突变作用,从而对人类的生存与健康构成巨大威胁。由于产毒真菌可以在粮食与水果的生长、收获、储存、加工乃至运输的整个食物链阶段对食品进行污染,且所产生的真菌毒素在加工过程中不易被清除,因此被认为是不可避免的污染问题。由于真菌毒素污染的巨大危害,世界上各个国家纷纷制定严格的限量标准,各种检测方法也被开发应用于真菌毒素的检测。免疫学检测方法因为便宜、便捷、快速、操作简单等诸多优点,成为大量样品检测与现场快速检测的重要手段。本课题以几种主要的真菌毒素:黄曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、赭曲霉毒素、伏马毒素、杂色曲霉素、桔霉素与交链孢霉毒素作为检测对象,制备相应的高灵敏与高亲和力单克隆抗体,并以此为基础建立相应的免疫学快速检测方法。（1）根据实验需求将真菌毒素分子进行衍生化制备半抗原或者直接与载体蛋白（牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白和钥孔血蓝蛋白）进行偶联（CDI法、活化酯法、戊二醛法和甲醛法）制备完全抗原,并通过紫外、质谱、电泳等方法进行鉴定表征。（2）通过使用所合成的完全抗原进行BALB/c小鼠免疫、小鼠脾脏融合、杂交瘤细胞筛选与亚克隆、腹水制备与纯化,获得针对9种目标真菌毒素的共11株特异型/群选型单克隆抗体。（3）对所选用特异型的单克隆抗体进行表征,在经过工作点选择、标准品稀释液（离子强度、pH值、有机试剂含量）优化,建立针对9种真菌毒素的ELISA检测方法,并通过阴性样品添加回收实验进行验证。其中,AFB₁单克隆抗体7A1抗体亚型为IgG1型,亲和力常数为6.72×10⁹ L/mol,ELISA最优条件下IC₅₀值为0.013 ng/mL,回收率在76.0⁹3.4%之间;AFM₁单克隆抗体2E7抗体亚型为IgG2a型,亲和力常数为5.31×10⁹L/mol,ELISA最优条件下IC₅₀值为0.023 ng/m L,回收率在73.3⁹1.5%之间;DON单克隆抗体1G3抗体亚型为IgG1型,亲和力常数为4.26×10⁹ L/mol,ELISA最优条件下IC₅₀值为1.05 ng/m L,回收率在89.6¹14.5%之间;OTA单克隆抗体1G1抗体亚型为IgG2b型,亲和力常数为4.95×10⁹ L/mol,ELISA最优条件下IC₅₀值为0.066 ng/m L,回收率在72.5¹14.0%之间;FB₁单克隆抗体1H1抗体亚型为IgG2a型,其亲和力常数为7.71×10⁹L/mol,ELISA最优条件下IC₅₀值为2.17 ng/m L,回收率在89.5¹11.5%之间;STG单克隆抗体4G10抗体亚型为IgG2a型,亲和力常数为3.72×10⁹ L/mol,ELISA最优条件下IC₅₀值为0.09 ng/mL,回收率在78.3¹02.5%之间;CIT单克隆抗体1F2抗体亚型为IgG2b型,亲和力常数为1.65×10⁹L/mol,ELISA最优条件下IC₅₀值为0.76 ng/mL,回收率在117.8¹21.8%之间;AOH单克隆抗体1G4抗体亚型为IgG1型,亲和力常数为4.71×10⁹L/mol,ELISA最优条件下IC₅₀值为3.49 ng/m L,回收率在97.5¹14.4%之间;TeA单克隆抗体5F6抗体亚型为IgG2b型,亲和力常数为3.29×10⁹ L/mol,ELISA最优条件下IC₅₀值为280.3 ng/mL,回收率在89.3¹15.8%之间。（4）选用特异型的单克隆抗体分别制备针对AFB₁、AFM₁、DON、OTA、FB₁、STG、CIT、AOH与TeA的胶体金试纸条,并进行优化（金纳米粒子标记抗体的pH值、标记抗体用量与T线包被浓度）。在最优条件下,其vLOD值分别为0.25、0.1、10、5、2.5、3、4、160、800μg/kg;消线值分别为0.5、0.2、50、20、10、12、20、640、3200μg/kg;cLOD值分别为0.04、0.02、3.79、1.26、0.53、0.58、0.88、19.4、206.6μg/kg。（5）选用群选型的真菌毒素单克隆抗体,制备可以同时检测20种真菌毒素的多重胶体金检测试纸条。对ZEA及其类似物的vLOD值、消线值与cLOD值分别为0.1¹μg/kg,0.25².5μg/kg与0.04⁰.17μg/kg。对DON及其类似物的v LOD值、消线值与cLOD值分别为2.5²50μg/kg,5⁵00μg/kg与0.06⁴9μg/kg。对T-2与HT-2的v LOD值、消线值与cLOD值分别为0.5¹μg/kg,1¹0μg/kg与0.15⁰.22μg/kg。对黄曲霉毒素的v LOD值、消线值与cLOD值分别为0.25¹μg/kg,0.5².5μg/kg与0.056⁰.49μg/kg。对伏马毒素的vLOD值、消线值与cLOD值分别为2.5¹0μg/kg,5²5μg/kg与0.53¹.05μg/kg。