近年来,不断出现人食用被猪链球菌（Streptococcus suis）污染的食物而导致感染的临床案例,感染者出现败血症,脑膜炎和中毒样休克等症状,严重者甚至死亡,上述事实表明猪链球菌的食源性感染正在对食品安全和人类健康造成严重威胁。“食品安全关键技术研发”重点专项明确指出要重点解决我国食品源头污染严重的问题。鉴于猪链球菌在猪身上的分离率接近100%,通过生物控制的重要方式——疫苗免疫清除定植在猪粘膜的猪链球菌,在食品生产消费链的源头净化猪肉,防控猪链球菌的食源性感染,无疑具有重要意义,因此本研究围绕猪链球菌减毒活疫苗的制备和评估展开。因为猪链球菌感染急性致死主要与天然免疫逃逸有关,我们筛选了猪链球菌与天然免疫逃逸相关的五个毒力基因sly,scp A,ssn A,fhb,ssads,构建了上述基因的敲除质粒,在猪链球菌2型菌株SC19的基础上依次敲除这五个基因,获得一株猪链球菌五基因缺失株,命名为2015033。研究发现,2015033的基本生物学特性如生长特性,荚膜生成能力等与SC19相比没有发生明显变化。体外实验显示,2015033失去了对绵羊红细胞的溶血活性,在人血中的增殖能力明显下降,对HBMEC,A549,Caco-2,HEp-2,He La的细胞毒性均有明显下降。在BALB/c小鼠模型中,与SC19相比,2015033的致死率明显下降,且更容易被小鼠清除,小鼠血清中IL-6,IL-10,IL-12p70,TNF-α,IFN-γ,MCP-1六种炎症因子的含量检测显示,2015033所引起的炎症反应大大低于SC19。将2015033皮下免疫小鼠,能够诱导小鼠产生高效价的猪链球菌特异性Ig G,Ig G1,Ig G2a抗体,其中Ig G1抗体效价明显高于Ig G2a抗体,表明疫苗刺激小鼠产生了Th1和Th2两种免疫应答,而Th2型免疫应答占优势。免疫后的小鼠血清对ST7菌株SC19,ST1菌株P1/7和ST658菌株LSM102均具有明显的调理杀菌作用,且免疫2015033可以有效地保护小鼠抵御这三种不同ST菌株的感染,表明2015033作为减毒活疫苗具有交叉保护力。小鼠血清中IL-6,IL-10,IL-12p70,TNF-α,IFN-γ,MCP-1六种炎症因子的含量检测显示,免疫2015033可以有效地抑制SC19感染所引起的炎症风暴。鉴于2015033在人血和猪血仍然具有较强的增殖能力,在2015033的基础上再敲除五个猪链球菌逃避天然免疫相关的毒力因子iga,nud P,ideSsuis,end Asuis,mrp,获得一株猪链球菌十基因缺失株,命名为2015800。研究发现,2015800的基本生物学特性与SC19相比没有明显变化,但2015800的细胞毒性和溶血活性明显下降,在人血和猪血中的生长受到了明显的抑制。此外,2015800对BALB/c小鼠的致死率与SC19相比明显下降,且2015800所引起的小鼠炎症反应明显低于SC19。