目的:研究骨碎补总酮、阿仑膦酸钠及骨碎补总酮阿仑膦酸钠二者合用对维甲酸所致的雌性SD大鼠骨质疏松性骨折的骨折愈合及骨生物力学的影响;以及对骨碎补总酮巴布膏进行初步的研制。方法:(一)、骨碎补总酮对雌性SD大鼠骨质疏松性骨折愈合及骨生物力学影响的实验研究40只雌性SD大鼠被随机分成2组,对照组5只用相同容量的生理盐水灌胃,骨质疏松组35只运用维甲酸浓度为80mg.kg-1.d-1灌胃制造雌性SD大鼠实验性骨质疏松模型,连续灌胃15天后,骨质疏松组随机选择5只与对照组5只一起行骨密度检查确认骨质疏松造膜成功后,将剩余30只大鼠按随机原则被分成2组,每组各15只。麻醉后,消毒铺巾,切开暴露右侧股骨,将右股骨截骨造成横行骨折,同时用φ1.Omm克氏针行股骨髓内固定,二组大鼠分别在术后第2日开始给予灌胃,对照组:生理盐水8ml.kg-1.d-1,骨碎补总酮组:90mg.kg-1.d-1,分别在骨折髓内固定术后2周、4周和6周每组各选5只试验大鼠麻醉后用颈椎脱位法处死并行x线检查和骨痂测量,同时取大鼠右侧股骨骨痂标本行组织学检查以了解骨碎补总酮对实验性骨质疏松性大鼠骨折愈合的影响,另取大鼠左侧股骨全长标本给予生物力学测试以了解骨碎补总酮对实验性骨质疏松性大鼠的骨生物力学影响。(二)、阿仑膦酸钠和骨碎补总酮对SD大鼠骨质疏松性骨折愈合及骨生物力学影响的试验研究70只雌性SD大鼠根据随机原则被分成2组,对照组5只用2ml/d的生理盐水灌胃,骨质疏松组65只大鼠用维甲酸浓度为80mg.kg-1.d-1灌胃制造雌性SD大鼠实验性骨质疏松模型。在连续灌胃15天后,骨质疏松组随机选择5只与对照组5只一起行小动物骨密度仪检查骨密度,确认骨质疏松造膜成功后,将剩余65只大鼠按随机原则被分成4组,每组各15只。用水合氯醛腹腔注射加利多卡因麻醉后,剃毛局部切开,暴露右侧股骨中上段,将右股骨骨折截骨造成横行骨折,同时用φ1.0mm克氏针行髓内固定,术后给予换药和注射抗生素3天预防感染,并分别在术后第二日开始给予灌胃,阿仑膦酸钠组:阿仑膦酸钠组40mg/kg.w;骨碎补总酮组:骨碎补总酮90mg/kg.d;二者合用组:阿仑膦酸钠组40mg/kg.w和骨碎补总酮90mg/kg.d;对照组:生理盐水8ml/kg.w灌胃。分别在骨折内固定术后2周,4周,6周从每组中随机抽取5只,水合氯醛麻醉颈椎脱位法处死大鼠后行X线检查、PACS系统X线骨痂测量及取右侧股骨骨痂标本行组织学检查来评估阿仑膦酸钠,骨碎补总酮及二者合用对维甲酸酸所致的雌性SD大鼠骨质疏松性骨折骨愈合过程的影响;另取左侧股骨全长给予生物力学测试以了解阿仑膦酸钠、骨碎补总酮以及二者合用对维甲酸酸所致的雌性SD大鼠骨质疏松骨的生物力学性能影响。(三)、骨碎补总酮巴布膏的研制提取骨碎补总酮,以阿拉伯胶、西黄耆胶、甘油、压敏胶、氧化锌按2.0:2.0:4.0:0.6:0.1的最佳配比做成巴布膏基质,并加入透皮促进剂:以氮酮与丙二醇共同作为促透剂,且两者用量均为4%。制备工艺按照以下步骤:(1)醇提:取处方骨碎补总酮药材粉碎成粗颗粒(10目),加入95%乙醇,提取3次,第1次2小时,第2次1小时,第3次40分钟,趁热过滤,合并醇液,回收乙醇浓缩成浸膏(相对密度1.23)备用。(2)基质的制备:取阿拉伯胶、西黄耆胶、压敏胶、氧化锌按加适量水溶胀,加热使溶解,在50度水浴中,不断搅拌,依次加入氧化锌、以及氮酮、丙二醇和甘油三者混合物(氮酮、丙二醇、甘油在研钵中研均匀)混合均匀即得。(3)制膏及涂布:取中药提取浸膏与基质透皮剂在50度水浴恒温加热,搅拌20-40分钟混合均匀,将其涂于无纺布上,盖衬,剪成8*10大小(每片膏药重量10g)。按以下制备工艺进行巴布剂制备工艺主要包括基质成型工艺和制剂成型工艺初步制作骨碎补总酮巴布膏,基本过程如下。主药 支持层 背衬层↘ ↘ ↘基质→膏体层→涂布→裁剪→包装→成品结果:(一)生物力学结果:(1)弹性比率:SD大鼠骨质疏松性骨折内固定术后2周时,阿仑膦酸钠和骨碎补总酮二者合用比单用骨碎补组可明显增强其骨骼的弹性比率P=0.022;阿仑膦酸钠组较对照组能增强骨骼弹性比率P<0.05。(2)最大载荷:骨碎补总酮,阿仑膦酸钠及二者合用均能在骨折固定术后4周时能有效改善骨质疏松大鼠股骨的最大载荷的生物力学性能,P<0.05。(二)骨痂测量结果:(1)骨折内固定术后2周时:骨碎补总酮组骨痂较对照组小P=0.007;与阿仑膦酸钠组对比骨痂也较小P=0.004;与联合用药组相比骨痂也较小P=0.027,说明骨碎补总酮的骨痂较其他组来说骨痂成熟较快,有促进骨折愈合作用。(2)骨折内固定术后4周时:阿仑膦酸钠组与对照组比较,P=0.036;与骨碎补总酮组比较,P<0.001;与联合用药组比较P=0.011,可以认为4周时阿仑膦酸钠组形成的骨痂较其他组大,阿仑膦酸钠的早期应用可能影响骨折的愈合,延长骨折的成熟,而骨碎补总酮组与对照组比较,P=0.005;与阿仑膦酸钠组比较,P<0.001;与联合用药组比较,P=0.015,可以认为4周时骨碎补总酮组所形成的骨痂较其他组小进一步显示了骨碎补总酮有促进骨痂成熟,促进骨折愈合的作用。(3)骨折内固定术后6周:各组之间差异均无显著性意义,P>0.05。(三)X线读片结果:骨折内固定术后2周时,骨折线均比较明显,少许骨痂形成,但不明显,与对照组相比各实验组骨折端出现半透明带。骨折内固定术后4周时x线显示在阿仑膦酸钠组,骨碎补总酮组及联合用药组中内外骨痂生长,骨折线开始变得模糊,骨折内固定术后6周时骨折线完全消失,然而骨折内固定术后4周时对照组骨折线仍然明显,但已经开始出现半透明带,6周时骨折线仍然未完全消失。(四)组织学检查结果:对照组和阿仑膦酸钠组各期原始小梁状骨表面及骨陷窝内破骨细胞数明显较其他组少。骨碎补总酮组和联合用药组各期原始小梁状骨表面成骨细胞及骨陷窝内破骨细胞数明显较其他组多;软骨性骨痂取代纤维骨加快,同时软骨骨痂向骨性骨痂转化也较快。(五)中药巴布膏研制结果:经过调制基质加入促透剂,以每克膏药含9mg骨碎补总酮和每克膏药含27mg骨碎补总酮制得低剂量骨碎补总酮巴布膏和高剂量骨碎补总酮巴布膏2种剂型。结论:阿仑膦酸钠和骨碎补总酮二者均能有效增加维甲酸所致的骨质疏松性SD大鼠的股骨的生物力学性能,包括骨的最大载荷,骨的压缩刚度以及骨的弹性比率。骨碎补总酮能构促进维甲酸所致的骨质疏松性SD大鼠股骨骨折的骨愈合,加快骨痂的成熟。阿仑膦酸钠和骨碎补总酮的联合治疗对维甲酸所致的骨质疏松性SD大鼠的骨折愈合和骨痂形成有一种附加的效果。骨碎补总酮中药巴布膏的初步研制是可行的,给骨碎补总酮外用提供一种新的剂型。意义:通过试验我们进一步证实骨碎补总酮有利于促进骨质疏松性骨折的骨愈合,提高的骨生物力学强度,与阿仑膦酸钠的合用有叠加效果。接着我们要研制成功了国内第一帖骨碎补总酮巴布膏制剂意义重大。我国古代早已有“透皮给药技术”即俗称“狗皮膏药”二者原理是一样的,“狗皮膏药”所存在的缺点是,贴剂达不到当今世界经皮给药技术的要求:透皮性、粘贴性差、反复粘贴次数少、不亲水、尤其严重的是透皮给药的药物利用率低并且对人体皮肤过敏。而新型、天然及合成高分子巴布剂基质平台,避免了这些缺点,从而将成为未来医药界贴剂制作广泛使用的载体。从西药巴布膏如氟比洛芬巴布膏近几年在市场上的巨大成功来看,据有关机构预测,在未来的20～30年内,大约有30%以上的药物将改成经皮给药制剂,势必掀起一个内病外治的新高潮。而我国拥有丰富且疗效确切的中药贴敷剂资源和悠久的中医外治法历史,我们相信,随着基质原料品种的不断增加,中药巴布剂研究的日益深入,它潜在的巨大市场将被开发。而随着人口老龄化,骨质疏松性骨折越来越成为大家关注的焦点,骨碎补总酮可以治疗骨质疏松性骨折,可以促进骨折愈合,提高骨生物力学特性,同时药典提到可以治疗白癜风,外用是安全,如果研制成巴布膏制剂并进行后续研究其产生的经济和社会效益将是不可限量。我们已经制备成功了国内第一帖的骨碎补总酮巴布膏,后面的进一步研究还在继续进行中。