论文部分内容阅读
前言促红细胞生成素(erythropoietin,Epo)的基本功能是促进红系祖细胞增生和分化,Epo与其受体(erythropoetin receptor,EpoR)结合发挥作用。近些年的研究发现EpoR除在红系祖细胞表达外,还可在多种非造血组织中表达,这表明Epo的作用并不局限于造血组织,因此Epo是很可能一种作用广泛和多效的细胞因子。近来的研究发现Epo和EpoR在多种类型的恶性肿瘤细胞及其来源的细胞系表达,并发现恶性肿瘤内存在的自分泌或旁分泌Epo-EpoR信号与恶性肿瘤的生物学行为改变有关,如促进肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤细胞凋亡和降低肿瘤细胞对放化疗的敏感性。目的目前对Epo和EpoR在蕈样肉芽肿(mycosis fungoides,MF)患者皮损中淋巴细胞的表达国内外尚未有研究报道,本文拟采用免疫组化方法(S-P法)对MF患者皮损中淋巴细胞Epo及EpoR的表达情况进行初步研究。方法一、临床标本的选择选取MF和炎症性皮肤病(inflammatory dermatosis,ID)病例活检标本,MF组16例,包括早期(斑片或斑块期)12例和肿瘤期4例;ID组15例,包括银屑病6例、湿疹4例和扁平苔藓5例。所有入选病例均由3位皮肤病理医生阅读HE染色切片后明确诊断。入选患者均无明显心、脑、肝及肾等脏器病变和外周血异常,两组病例在年龄和性别构成比方面具有可比性。二、免疫组化方法(S-P法)将入选标本蜡块切成5μm厚切片,经过二甲苯和梯度酒精脱蜡后在PH值为6.0的柠檬酸缓冲液中进行抗原修复,然后用3%H2O2溶液孵育以消除内源性过氧化物酶活性,准备染色。主要试剂为:Epo抗体(兔源性多克隆抗体,H-162,1:200稀释;Santa Cruz biotechnologies)、EpoR抗体(兔源性多克隆抗体,C-20,1:400稀释;Santa Cruz biotechnologies)、免疫组化染色试剂盒(美国ZYMED公司生产SP-9000)和显色剂DAB(北京中杉生物技术有限公司提供),按照用法指导操作。免疫组化染色后用苏木素复染,塑胶封片待观察。三、免疫组化染色对照以侵袭性恶性黑素瘤标本作为阳性对照,以PBS代替Epo和EpoR抗体作为阴性对照。四、结果判定使用共览显微镜(Olympus BX50)观察HE切片及免疫组化染色结果。1、判定标准Epo染色标本,细胞胞浆表达为阳性;EpoR染色标本,细胞胞浆或胞膜表达均为阳性。2、评分标准采用盲法,由3位病理医生对2组免疫组化染色切片进行半定量评分。淋巴细胞无着色记为0分,胞浆局部细小颗粒着色视为轻度表达并记为1分,胞浆中等细小颗粒着色或局部粗大颗粒着色视为中度表达并记为2分,胞浆弥漫性细小颗粒着色或明显粗大颗粒着色视为强表达并记为3分。每个视野(×100)的淋巴细胞染色积分=1×轻度表达%+2×中度表达%+3×强表达%,每张切片随机选取3个视野,取其平均值为其积分。五、统计方法采用SPSS 11.5统计分析软件处理数据,P≤0.05认为有统计学差异。结果MF早期病例组(n=12)与ID组(n=15)相比,淋巴细胞Epo及EpoR表达水平明显增强,p值分别为0.021和0.013,有统计学差异;MF组(n=16)与ID组(n=15)相比,淋巴细胞Epo及EpoR表达水平显著增强,p值分别为0.005和0.003,有显著统计学差异。结论Epo-EpoR信号可能参与了MF的发病过程。