【摘 要】
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为了提高淀粉的利用率,本研究采用PCR方法克隆了来源于Pseudomonasamyloderamosa SB-15的异淀粉酶基因(iso),重组进克隆载体pBluescript M13+进行DNA序列分析,再将iso基因克
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为了提高淀粉的利用率,本研究采用PCR方法克隆了来源于Pseudomonasamyloderamosa SB-15的异淀粉酶基因(iso),重组进克隆载体pBluescript M13+进行DNA序列分析,再将iso基因克隆至含MFa-1启动子、信号肽和PGK终止序列的质粒YepMT04中获得重组质粒pISOMT04,然后从质粒上切下含"MFa1启动子-MFa1信号肽-iso-PGK终止序列"的异淀粉酶基因表达盒,将此表达盒取代YIp4RGAn的糖化酶基因表达盒,构建含有异淀粉酶基因的单基因整合型表达载体YIpISO;同时将此表达盒克隆至含糖化酶基因的YIp4RGAn中构建含有糖化酶基因与异淀粉酶基因的双基因整合型表达载体YIpGISO.用电穿孔法将YIpGISO及YIpISO分别转化酿酒酵母JL108,经PCR鉴定和酶活分析筛选出整合了iso基因并且具有异淀粉酶活性的转化子JL108(YIpISO)及JL108(YIpGISO),并证明这两株工程菌经过150世代后其酶活力基本不变,表明它们是稳定的.对这两株工程菌的淀粉水解能力和酒精生产能力进行了分析,并用含异淀粉酶基因的工程菌JL108(YIpISO)及含糖化酶基因的工程菌JL108(YIp4RGAn)进行双菌混合发酵,结果发现其淀粉水解能力与产酒率均比含有异淀粉酶与糖化酶双基因的工程菌JL108(YIpGISO)及含糖化酶单基因的工程菌JL108(YIp4RGAn)稍高,说明引入异淀粉酶基因对提高淀粉的利用率和产酒率有促进作用.此外我们还摸索了出双菌发酵时两种工程菌的最适浓度比例.
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